BsaI
BsaI, ஒரு IIs கட்டுப்பாடு எண்டோநியூக்லீஸ் கட்டுப்பாடு எண்டோநியூக்லீஸ், இது பேசிலஸ் ஸ்டெரோதெர்மோபிலஸ் இலிருந்து குளோன் செய்யப்பட்ட மற்றும் மாற்றியமைக்கப்பட்ட BsaI மரபணுவைக் கொண்டு செல்லும் arecombinant E. coli விகாரத்திலிருந்து பெறப்பட்டது.அதன் அங்கீகார வரிசை மற்றும் பிளவு தளங்கள் பின்வருமாறு:
5'······GGTCTC(N)··············3'
3'······CCAGAG(NNNNN)···5'
கூறுகள்
BsaI(20U/μL), 10xBsaI தாங்கல்
சேமிப்பு
-25℃~-15℃ இல் சேமிக்கவும், 1 வருடத்திற்கு செல்லுபடியாகும் (மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-கரை சுழற்சிகளைத் தவிர்க்கவும்).
சேமிப்பு தாங்கல்
10mM Tris-HCl, 200mM NaCl, 1mM DTT 0.1mM EDTA, 200µg/ml மறுசீரமைப்பு அல்புமின், 50% கிளிசரால்.(pH 7.4 @ 25°C).
பொருளின் பண்புகள்
அதிக செயல்பாடு, விரைவான செரிமானம்;
1. குறைந்த நட்சத்திர செயல்பாடு, "ஸ்கால்பெல்" போன்ற துல்லியமான வெட்டு உறுதி;
2. BSA இல்லாமல் மற்றும் விலங்கு தோற்றம் இலவசம்.
மெத்திலேஷன் உணர்திறன்
அணை மெத்திலேஷன்: உணர்திறன் இல்லை;
டிசிஎம் மெத்திலேஷன்: ஒன்றுடன் ஒன்று சேர்வதன் மூலம் குறைபாடு;
சிபிஜி மெத்திலேஷன்: ஒன்றுடன் ஒன்று சேர்வதன் மூலம் தடுக்கப்பட்டது.
அலகு வரையறை
50 µL மொத்த எதிர்வினை அளவு 37 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 1 மணி நேரத்தில் 1 µg உள் கட்டுப்பாட்டு டிஎன்ஏவை ஜீரணிக்கத் தேவையான நொதியின் அளவு வரையறுக்கப்படுகிறது.
தர கட்டுப்பாடு
புரதத் தூய்மை மதிப்பீடு (SDS-PAGE): Bsa I இன் தூய்மை ≥ 95% Coomassie Blue கண்டறிதலைப் பயன்படுத்தி SDS-PAGE பகுப்பாய்வு மூலம் தீர்மானிக்கப்பட்டது.
RNase:16 மணிநேரத்திற்கு 1.6 μg MS2 RNA உடன் Bsa I இன் 20 யூ
குறிப்பிட்ட DNase செயல்பாடு:20 Uof BsaI 1 μg PhiX174 DNA உடன் 16 மணிநேரத்திற்கு 37 ℃ க்கு agarose gel எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் தீர்மானிக்கப்படும் அதிகப்படியான DNA ஐ அளிக்காது.
பிணைப்பு மற்றும் மறுசீரமைப்பு:1 μg செரிமானத்திற்குப் பிறகு
E.coli DNA:2Uof VaccinivirusCapping என்சைம், E. coli 16S rRNA லோக்கஸுக்குக் குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்களுடன் TaqManqPCR ஐப் பயன்படுத்தி E. coli மரபணு DNA இருப்பதைத் திரையிடுகிறது.E. coli மரபணுவின் DNA மாசுபாடு ≤1 E. coli மரபணு ஆகும்.
பாக்டீரியா எண்டோடாக்சின்:LAL-சோதனை, ChinesePharmacopoeiaIV2020edition படி, ஜெல் வரம்பு சோதனை முறை, பொது விதி (1143).பாக்டீரியா எண்டோடாக்சின் உள்ளடக்கம் ≤10 EU/mg இருக்க வேண்டும்.
எதிர்வினை அமைப்பு மற்றும் நிபந்தனைகள்
கூறு | தொகுதி |
BsaI (20 U/μL) | 1μL |
டிஎன்ஏ | 1μg |
10 x BsaI தாங்கல் | 5μL |
dd H2O | 50 μL வரை |
37°C வெப்பநிலையில் 15-30 நிமிடங்கள் அடைகாக்கவும்.வெப்ப செயலிழப்பு: 20 நிமிடங்களுக்கு 80°C.
பரிந்துரைக்கப்பட்ட எதிர்வினை அமைப்பு மற்றும் நிபந்தனைகள் ஒப்பீட்டளவில் நல்ல நொதி செரிமான விளைவை வழங்க முடியும், இது குறிப்புக்கு மட்டுமே, விவரங்களுக்கு பரிசோதனை முடிவுகளைப் பார்க்கவும்.
விண்ணப்பங்கள்
கட்டுப்பாடு என்சைம் செரிமானம் வேகமாக குளோனிங்.
பயன்பாடு பற்றிய குறிப்புகள்
1.எதிர்வினை அளவின் நொதியின் அளவு ≤ 1/10.
2. ஸ்டாராக்டிவிட்டிமையோக்குர்வெங்லிசரால் செறிவு 5% க்கும் அதிகமாக உள்ளது.
3. பரிந்துரைக்கப்பட்ட விகிதத்திற்கு கீழே அடி மூலக்கூறு இருக்கும்போது பிளவு செயல்பாடு ஏற்படலாம்.