prou
தயாரிப்புகள்
Dnase assay Kit (Fluorescence) HCP0034A சிறப்புப் படம்
  • Dnase Assay Kit (ஃப்ளோரசன்ஸ்) HCP0034A

Dnase Assay Kit (ஃப்ளோரசன்ஸ்)


பூனை எண்:HCP0034A

தொகுப்பு: 48T/96T

DNase கண்டறிதல் கருவியானது ஃப்ளோரோஃபோர்-லேபிளிடப்பட்ட டிஎன்ஏ ஆய்வு அடிப்படையிலானது.

தயாரிப்பு விளக்கம்

தயாரிப்பு தரவு

DNase கண்டறிதல் கருவியானது ஃப்ளோரோஃபோர்-லேபிளிடப்பட்ட டிஎன்ஏ ஆய்வு அடிப்படையிலானது.மாதிரியில் DNase செயல்பாடு இல்லாதபோது, ​​ஆய்வு நிலையானது மற்றும் ஒளிரும் சமிக்ஞையை உருவாக்காது;மாதிரியில் DNase செயல்பாடு இருக்கும்போது, ​​ஆய்வு சிதைந்து, படிப்படியாக மேம்படுத்தப்பட்ட ஃப்ளோரசன்ஸ் சிக்னலில் விளைகிறது;ஒளிரும் சமிக்ஞையின் அதிகரிப்பு விகிதம் நொதிகளின் எண்ணிக்கை மற்றும் செயல்பாட்டுடன் நேர்மறையாக தொடர்புடையது.மாதிரியானது DNase மூலம் மாசுபட்டதா என்பதைத் தீர்மானிக்க, ex/em=485/525nm அலைநீளத்தில் அளவிட, ஃப்ளோரசன்ஸ் மைக்ரோ பிளேட் ரீடரைப் பயன்படுத்தவும்.


  • முந்தைய:
  • அடுத்தது:

  • விண்ணப்பம்

    மாதிரிகளில் DNase மாசுபாட்டைக் கண்டறிய இந்த கிட் பயன்படுத்தப்படுகிறது.

     

    Cஎதிர்ப்பாளர்கள்

    பெயர்

    HCP0034A-01

    (192T)

    HCP0034A-02

    (48T)

    10× எதிர்வினை தீர்வு

    2.0மிலி

    0.5மிலி

    டிஎன்ஏ ஆய்வு

    1 குழாய்

    1 குழாய்

    TE தாங்கல்

    2.0மிலி

    0.5மிலி

    DNase I தரநிலை (2U/μL)

    20μL

    10μL

    நிலையான நீர்த்தல் இடையக

    12மி.லி

    6மிலி

    DNase & RNase இல்லாத நீர்

    25 மிலி

    25 மிலி

    DNase RNase தொலைவில் உள்ளது

    50மிலி

    50மிலி

     

    சேமிப்பு மற்றும் நிலைத்தன்மை

    1.-25 ~ - 15 ℃ இல் கொண்டு செல்லப்படுகிறது;

    2.கிட்டின் வெவ்வேறு கூறுகள் வெப்பநிலைக்கு ஏற்ப தனித்தனியாக சேமிக்கப்படுகின்றன:

    பெயர்

    வெப்ப நிலை

    10× எதிர்வினை தீர்வு

    -25 ~ - 15℃

    டிஎன்ஏ ஆய்வு

    -25 ~ - 15℃

    TE தாங்கல்

    -25 ~ - 15℃

    DNase I தரநிலை (2U/μL)

    -25 ~ - 15℃

    நிலையான நீர்த்தல் இடையக

    -25 ~ - 15℃

    DNase & RNase இல்லாத நீர்

    -25 ~ 30℃

    DNase RNase தொலைவில் உள்ளது

    2 ~ 30℃

    1. திறக்கப்படாத கிட்டை 12 மாதங்களுக்கு சேமிக்கவும்.

    2.கிட் திறந்த பிறகு 6 மாதங்களுக்கு சேமிக்கவும்.ஒளி மற்றும் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் உருகுவதைத் தவிர்க்க, டிஎன்ஏ ஆய்வுக் கரைசலை ஒற்றைப் பயன்பாட்டு அளவின்படி அலிகோட் செய்ய பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

     

    தேவையான உபகரணங்கள் மற்றும் நுகர்பொருட்கள்

    1.ஃப்ளோரசன்ஸ் மைக்ரோ பிளேட் ரீடர் (ex/em=485/525nm அலைநீளம் உட்பட)

    2.DNase&RNase-இலவச குழாய்கள் மற்றும் குறிப்புகள்

    3.DNase&RNase இல்லாத EP குழாய்

    4.DNase&RNase இல்லாத கருப்பு வெளிப்படையான 96-கிணறு தட்டு

    எதிர்வினை தயாரிப்பு

    1.கிட்டை வெளியே எடுத்து அறை வெப்பநிலைக்கு (18~25℃) சமநிலைப்படுத்தவும், 10×எதிர்வினை தீர்வு, TE பஃபர், DNase I தரநிலை (2U/μL), ஸ்டாண்டர்ட் டிலுஷன் பஃபர் போன்ற கூறுகளை அசைத்து கலக்கவும், பின்னர் உடனடியாக மையவிலக்கு செய்யவும்.(10 வினாடிகளுக்கு 4000~7000rpm இல் மையவிலக்கு).

    2.டிஎன்ஏ ஆய்வை 4000~7000ஆர்பிஎம்மில் 60 விநாடிகளுக்கு மையவிலக்கு செய்து, குழாயின் அடிப்பகுதியில் சேகரிக்கவும், கவனமாக குழாய் தொப்பியைத் திறந்து, டிஎன்ஏ ஆய்வு சேமிப்பு கரைசலாக கரைக்க 40μL TE இடையகத்தைச் சேர்க்கவும், டிஎன்ஏ ஆய்வு சேமிப்பு கரைசலை மாற்றவும். மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் உருகுவதைத் தவிர்க்க, ஒற்றைப் பயன்பாட்டு அளவு மற்றும் அவற்றை -25 ~ -15 °C இல் சேமிக்கவும்.ஒவ்வொரு முறை சோதனை செய்யும் போதும் ஆய்வு சேமிப்பக தீர்வை எடுத்து, TE இடையகத்துடன் 50 முறை நீர்த்துப்போகச் செய்யவும் (உதாரணமாக, 490μL TE இடையகத்தை 12μL டிஎன்ஏ ஆய்வில் சேர்க்கவும்) டிஎன்ஏ ஆய்வு வேலை செய்யும் தீர்வு.ஒளி மற்றும் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் உருகுவதைத் தவிர்க்க டிஎன்ஏ ஆய்வு வேலை செய்யும் தீர்வு -25 ~ -15 °C இல் சேமிக்கவும்.

     

    கண்டறிதல் படிகள்

    1.உணர்திறன் இழப்பு அல்லது சமிக்ஞை மிகைப்படுத்தல் அபாயத்தைத் தவிர்க்க, முதல் சோதனைக்கு முன் பொருத்தமான ஆதாயத்தை அமைக்கவும்.

    1) கருவி அளவுருக்கள்:

    கண்டறிவதற்கு முன் தட்டு 10~ 15 வினாடிகள் குலுக்கல்;

    தூண்டுதல் அலைநீளம் λEx=485nm;

    உமிழ்வு அலைநீளம் λEm=525nm;

    தானியங்கி ஆதாய செயல்பாட்டைப் பயன்படுத்தவும்;

    வெப்பநிலை 37℃;

    இறுதிப்புள்ளி முறை.

    முடிந்தால் ஆதாயத்தை தானாக அளவிடவும், மாற்றாக ஆரம்பத்தில் நடுத்தர ஆதாய அமைப்பைப் பயன்படுத்தவும்.

    குறிப்பு: வெவ்வேறு கருவிகளை அமைக்கும் முறை சீரானதாக இல்லை, விவரங்களுக்கு கருவி சப்ளையரை அணுகவும்.

    2) 96-கிணறு தட்டில் 2 கிணறுகளைத் தேர்ந்தெடுத்து, ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 10μL டிஎன்ஏ ஆய்வு வேலை தீர்வு மற்றும் 10μL 10×எதிர்வினை தீர்வு சேர்க்கவும்;

    3) ஒரு கிணற்றில் 80μL DNase&RNase-இல்லாத தண்ணீரைச் சேர்க்கவும், மற்றொரு கிணற்றில் 79μL DNase&RNase-இல்லாத தண்ணீர் மற்றும் 1μL DNase I தரநிலை (2U/μL) ஆகியவற்றைச் சேர்க்கவும்.

    4) தட்டை 37 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் இருண்ட இடத்தில் வைத்து 30 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு சோதிக்கவும்.

    5) ஆதாயத்தை ஆட்டோஸ்கேலுக்கு அமைத்தால், டேட்டா கோப்பின் இன்ஸ்ட்ரூமென்ட் பாராமீட்டர் பட்டியில் ஆதாய மதிப்பு காட்டப்படும், இது G1 எனக் குறிக்கப்படும்.

    6) ஆரம்பத்தில் நடுத்தர ஆதாய அமைப்பைப் பயன்படுத்தும் போது, ​​அதைக் கவனிக்க வேண்டும்: உயர் ஒளிரும் மதிப்பு கருவியின் மேல் வரம்பை மீறினால், ஆதாய மதிப்பை சரியான முறையில் குறைக்க வேண்டும்;உயர் ஒளிரும் மதிப்பு கருவியின் மேல் வரம்பிற்குக் கீழே இருந்தால், ஆதாய மதிப்பை சரியான முறையில் அதிகரிக்க வேண்டும்;இறுதியாக, பொருத்தமான ஆதாய மதிப்பு பெறப்படுகிறது, இது G2 என குறிக்கப்படுகிறது.

     

    2.கருவி அளவுருக்களை அமைக்கவும்:

    கண்டறிவதற்கு முன் தட்டு 10~ 15 வினாடிகள் குலுக்கல்;

    தூண்டுதல் அலைநீளம் λEx=485nm;

    உமிழ்வு அலைநீளம் λEm=525nm;

    ஆதாய மதிப்பை G1 அல்லது G2 என அமைக்கவும்.

    வெப்பநிலை 37℃;

    மைக்ரோ பிளேட் ரீடர் இயக்க பயன்முறையை ஆதரித்தால், இயக்கவியல் கண்டறிதல் பயன்முறையைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது, 1 முதல் 1.5 நிமிடங்கள் இடைவெளியுடன், மொத்த நேரம் 30 நிமிடங்கள் ஆகும்.

     

    3.மாதிரி தயாரிப்பு

    பரிந்துரைக்கப்பட்ட மாதிரி அளவு 80μL ஆகும்.பரிசோதிக்கப்பட வேண்டிய மாதிரி 80μL க்கும் குறைவாக இருந்தால், DNase&RNase இல்லாத தண்ணீரில் 80μL வரை நீர்த்துப்போகவும்.

    சோதனை செய்யப்படும் மாதிரியானது ஃப்ளோரோஃபோரின் ஒளிர்வை பாதிக்கும் பொருட்கள் (இருண்ட கரைசல்கள், அதிக செறிவுள்ள பிசுபிசுப்பான பொருட்கள் அல்லது சர்பாக்டான்ட்கள் போன்றவை) கொண்டிருக்கும் போது, ​​மாதிரியை DNase&RNase-இல்லாத நீரில் நீர்த்த வேண்டும், ஆனால் நீர்த்த செயல்பாடு பாதிக்கப்படும் என்பதை நினைவில் கொள்ளவும். உணர்திறன்.DNase செயல்பாட்டு தடுப்பான்கள் (உயர் அயனி வலிமை தீர்வுகள், pH<4 அல்லது pH>9 பஃபர்கள், புரதம் நீக்கிகள் போன்றவை) கொண்ட மாதிரியை சோதிக்க வேண்டும், அளவீட்டு முடிவு மாதிரி கரைசலின் ஒட்டுமொத்த நொதி செயல்பாடு ஆகும். நொதியின் தனிப்பட்ட செயல்பாடு.

    DNase I தரநிலையை (2U/μL) ஸ்டாண்டர்ட் டிலுஷன் பஃபருடன் பின்வருமாறு நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள்:

    இல்லை.

    தயாரிப்பு செயல்முறை

    செறிவு

    1

    2μL DNase I தரநிலை + 198μL ஸ்டாண்டர்ட் டைலேஷன் பஃபர்

    2×10-2U/μL

    2

    2μL எண். 1 மாதிரி + 198μL ஸ்டாண்டர்ட் டிலுஷன் பஃபர்

    2×10-4U/μL

     எண். 2 மாதிரியை DNase & RNase இல்லாத தண்ணீரில் 10 முறை நீர்த்துப்போகச் செய்யவும்:

    3

    20μL எண். 2 மாதிரி + 180μL DNase& RNase-இலவச நீர்

    2×10-5U/μL

    எண் 3 மாதிரி நேர்மறைக் கட்டுப்பாட்டாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது;DNase&RNase இல்லாத நீர் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டாக பயன்படுத்தப்படுகிறது.

    1. மருந்தளவு மற்றும் சோதனை

    1) 96-கிணறு தட்டுக்கு 10μL டிஎன்ஏ ஆய்வு வேலை தீர்வு மற்றும் 10μL 10×எதிர்வினை தீர்வு சேர்க்கவும்.முறையே எதிர்மறைக் கட்டுப்பாடு மற்றும் நேர்மறைக் கட்டுப்பாட்டைச் சேர்க்க 4 கிணறுகளைத் தேர்ந்தெடுக்கவும், மற்ற கிணறுகள் சோதிக்கப்பட வேண்டிய மாதிரிகளைச் சேர்க்க.ஒவ்வொரு மாதிரிக்கும் 2 பல கிணறுகள் உள்ளன, ஒவ்வொரு கிணற்றுக்கும் 80μL;

    2) உடனடியாக ஃப்ளோரசன்ஸ் சிக்னல் மதிப்பான RFU0 ஐ 0 நிமிடத்திற்கு சோதித்து படிக்கவும்.30 நிமிடங்களுக்கு 37 ℃ இருட்டில் வைக்கப்பட்ட பிறகு, ஃப்ளோரசன் சிக்னல் மதிப்பான RFU30 ஐ மீண்டும் 30 நிமிடங்களுக்கு சோதித்து படிக்கவும்.டைனமிக் பயன்முறையை ஏற்றுக்கொண்டால், 0~30 நிமிடத்திற்கான அனைத்து ஒளிரும் சமிக்ஞைகளையும் படிக்க முடியும்.

     

    சோதனை முடிவுகளின் விளக்கம்

    RFU30≥2×RFU0 எனில், பரிசோதிக்கப்பட வேண்டிய மாதிரி DNase ஆல் மாசுபட்டதாகக் கருதப்படுகிறது.

    குறிப்பு: பரிசோதிக்கப்பட வேண்டிய மாதிரி தீவிரமாக மாசுபட்டிருந்தால் அல்லது குறுக்கிடக்கூடிய பொருட்கள் இருந்தால், RFU0 (சோதனை செய்ய வேண்டிய மாதிரி) > RFU0 (நேர்மறை தரக் கட்டுப்பாடு) மற்றும் RFU30 (சோதனை செய்ய வேண்டிய மாதிரி) < 2 ×RFU0 (மாதிரி இருக்க வேண்டும் சோதிக்கப்பட்டது), தவறான எதிர்மறை தீர்ப்புக்கு வழிவகுக்கிறது.இந்த நேரத்தில், பரிசோதிக்கப்பட வேண்டிய மாதிரியானது DNase&RNase-இல்லாத நீரில் முன்கூட்டியே நீர்த்தப்பட்டு, பின்னர் சோதிக்கப்படும்.

     

    அளவு கண்டறிதல்

    பரிசோதிக்கப்பட வேண்டிய மாதிரி மாசுபட்டால் மற்றும் மாதிரியில் உள்ள DNase இன் செறிவு மதிப்பை தீர்மானிக்க வேண்டிய அவசியம் ஏற்பட்டால், அதை பின்வரும் நடைமுறைகள் மூலம் தீர்மானிக்க முடியும்:

    DNase I தரநிலையை (2U/μL) ஸ்டாண்டர்ட் டிலுஷன் பஃபருடன் பின்வருமாறு நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள்:

    இல்லை.

    தயாரிப்பு செயல்முறை

    செறிவு

    1

    2μL DNase I தரநிலை +198μL ஸ்டாண்டர்ட் டிலுஷன் பஃபர்

    2×10-2U/μL

    2

    2μL எண். 1 மாதிரி +198μL ஸ்டாண்டர்ட் டிலுஷன் பஃபர்

    2×10-4U/μL

    3

    100μL எண். 2 மாதிரி+100μL ஸ்டாண்டர்ட் டிலுஷன் பஃபர்

    1×10-4U/μL

    4

    100μL எண். 3 மாதிரி+100μL ஸ்டாண்டர்ட் டிலுஷன் பஃபர்

    5×10-5U/μL

    5

    100μL எண். 4 மாதிரி+100μL ஸ்டாண்டர்ட் டிலுஷன் பஃபர்

    2.5×10-5U/μL

    6

    100μL எண்.5 மாதிரி+100μL ஸ்டாண்டர்ட் டிலுஷன் பஃபர்

    1.25×10-5U/μL

    பின் எண். 3 ~ எண் 5 மாதிரிகளை DNase & RNase இல்லாத தண்ணீருடன் 10 முறை நீர்த்துப்போகச் செய்யவும்:

    7

    20μL எண்3 மாதிரி+180μL DNase&RNase இல்லாத நீர்

    1×10-5U/μL

    8

    20μL எண்4 மாதிரி+180μL DNase&RNase இல்லாத நீர்

    5×10-6U/μL

    9

    20μL எண்5 மாதிரி+180μL DNase&RNase இல்லாத நீர்

    2.5×10-6U/μL

    10

    20μL எண்6 மாதிரி+180μL DNase&RNase இல்லாத நீர்

    1.25×10-6U/μL

    எண். 7 ~ எண். 10 மாதிரிகள் தரநிலைகளாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன;DNase & RNase-இலவச நீர் 0-செறிவு மாதிரி.

    RFU0 மற்றும் RFU30 ஐப் பெறுவதற்கான கண்டறிதல் படிகளின் படி 0-செறிவு மாதிரி, தரநிலைகள் மற்றும் அசுத்தமான மாதிரியை ஒன்றாகச் சோதிக்கவும். abscissa (0 செறிவு 0), நேரியல் பொருத்தி, மற்றும் பொருத்துதல் சமன்பாடு y = ax + B கணக்கிட, மற்றும் தொடர்பு குணகம் r ≥ 0.99 இருக்க வேண்டும்.அசுத்தமான மாதிரியின் தோராயமான செறிவு மதிப்பைப் பெற, ∆RFU (அசுத்தமான மாதிரி) ஐ சமன்பாட்டிற்குள் y ஆகக் கொண்டு வந்து, x ஐக் கணக்கிட்டு, அதை மாதிரி முன்-நீர்த்தல் மடங்குகளால் பெருக்கவும்.

    குறிப்பு: கருவி சமிக்ஞையின் ஏற்ற இறக்கம் காரணமாக, ∆RFU<0, இந்த நேரத்தில், ∆RFU=0 என கணக்கிடப்படுகிறது.

     

    கண்டறிதல் செயல்திறன்

    1. கண்டறிதல் வரம்பு:DNase I: 1.25×10-6U/μL

    2. துல்லியம்: மாறுபாட்டின் உள் தொகுதி குணகம் ≤ 10%, இன்டர் பேட்ச் குணகம் மாறுபாடு ≤ 15%

     

    கவனம்

    1. மாதிரி சேர்க்கும் செயல்பாடு முடிந்தவரை வேகமாக இருக்க வேண்டும்.நீண்ட நேரம் சோதனையின் துல்லியத்தை பாதிக்கும்.

    2. வெவ்வேறு ஃப்ளோரசன்ட் என்சைம் லேபிளிங் கருவிகளின் அளவுருக்கள் வேறுபட்டவை.முதல் சோதனைக்கு முன் சரியான ஆதாயத்தை அமைக்கவும்.

    3. அனைத்து வினைகளும் பயன்படுத்துவதற்கு முன் முழுமையாக அசைக்கப்பட வேண்டும்.மாதிரிகளைச் சேர்க்கும் போது, ​​சேர்க்கப்பட்ட மாதிரிகள் கிணற்றுச் சுவரின் மேல் பகுதியில் சேர்வதைத் தவிர்ப்பதற்காக என்சைம் லேபிள் தட்டின் அடிப்பகுதியில் சேர்க்கப்பட வேண்டும்.மாதிரிகளைச் சேர்க்கும்போது, ​​குமிழ்களைத் தெறிக்கவோ அல்லது உருவாக்கவோ கூடாது என்பதில் கவனம் செலுத்துங்கள்.

    4. கிட்டில் உள்ள தரநிலை DNase I ஆகும், மேலும் அதன் செயலில் உள்ள அலகு ஒரு நொதியின் அளவு என வரையறுக்கப்படுகிறது, இது DNase I ரியாக்ஷன் பஃபரில் 10 நிமிடங்களில் 1 µg pBR322 DNAவை 37°C இல் முற்றிலும் சிதைக்கும். 1].ஒரு DNase I அலகு 0.3 குனிட்ஸ் அலகுக்கு சமம்[2].

    5. வெளிப்புற DNase மாசுபடுவதைத் தவிர்ப்பதற்காக, சோதனை அட்டவணை, கையுறைகள் மற்றும் பிற மேற்பரப்புகளின் மேற்பரப்பில் DNase RNase ஐ தெளிக்கலாம்.5 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு, அவற்றை சுத்தமான காகித துண்டுகளால் சுத்தம் செய்து, பின்னர் சோதனை நடவடிக்கைகளை மேற்கொள்ளவும்.

     

     

    உங்கள் செய்தியை இங்கே எழுதி எங்களுக்கு அனுப்பவும்