ஃபாஸ்ட் ஆம்ப்லி RT-qPCR பிரீமிக்ஸ் பிளஸ்-UNG
பூனை எண்: HCB5144E
Fast Ampli RT-qPCR Premix plus-UNG ஆனது குறிப்பாக lyophilization செயல்முறைகளுக்காக உருவாக்கப்பட்டது, ஃப்ளோரசன்ஸ் அளவீடு (TaqMan probe) RNA பெருக்க கண்டறிதலுக்குப் பயன்படுத்தப்படும் neocript reverse transcriptase மற்றும் விரைவான பெருக்க DNA பாலிமரேஸ் ஆகியவற்றைக் கொண்ட மரபணு மாற்றப்பட்ட மற்றும் திரையிடல் மூலம் PC20 ampl ஐ முடிக்க முடியும். - 40 நிமிடங்கள்.குறைந்த செறிவு கொண்ட ஆர்என்ஏ மாதிரிகளின் உயர் உணர்திறன் பெருக்கத்திற்கு ஏற்ற உயர் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் பிசிஆர் பெருக்க திறன் கொண்ட உயர் தடுப்பான்-சகிப்புத்தன்மையை இந்த ரியாஜென்ட் முன்வைக்கிறது.ஒரு நல்ல நிலையான வளைவை பரந்த அளவு வரம்பிற்குள் பெறலாம், மேலும் அளவீடு துல்லியமாக மேற்கொள்ளப்படும்.இந்த மறுஉருவாக்கமானது எதிர்ப்பு-தடுப்பு பெருக்க என்சைம் மற்றும் யுஎன்ஜி என்சைம் ஆகியவற்றின் கலவையான நொதியைப் பயன்படுத்துகிறது.இது தடுப்பான்களைக் கொண்ட மாதிரிகளில் இலக்கு மரபணுவின் நல்ல பெருக்கத்தை அடைவது மட்டுமல்லாமல், PCR எஞ்சிய மற்றும் ஏரோசல் மாசுபாட்டால் ஏற்படும் தவறான நேர்மறை பெருக்கத்தையும் திறம்பட தடுக்கிறது.அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ், எப்பென்டார்ஃப், பயோ-ராட், ரோச் மற்றும் பல போன்ற ஃப்ளோரசன்ட் அளவுள்ள PCR கருவிகளுடன் இந்த மறுஉருவாக்கமானது இணக்கமானது.நல்ல லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட வடிவம் மற்றும் தயாரிப்பு நிலைத்தன்மையைப் பெற இந்த மறுஉருவாக்கத்தை லியோபிலைசேஷனுக்குப் பயன்படுத்தலாம்.
எதிர்வினை கலவை
1. 12.5×FastAmpli Part Taq/UNG மிக்ஸ் (dNTPகளுடன்) (DG)
2. 50× FastAmpli Part RTase (DG)
3. 5 ×FastAmpliRT தாங்கல் (DG)
4. 4 × லைப்ரோடெக்டண்ட் (விரும்பினால்) (டிஜி)
களஞ்சிய நிலைமை
நீண்ட காலத்திற்கு -20℃ இல், 4℃ இல் 3 மாதங்கள் வரை சேமிக்க முடியும்.பயன்படுத்துவதற்கு முன் நன்கு கலக்கவும் மற்றும் தவிர்க்கவும்அடிக்கடி உறைதல்-கரைத்தல்.
சைக்கிள் ஓட்டுதல் நெறிமுறை
படி |
வெப்ப நிலை | வழக்கமான பி.சி.ஆர் செயல்முறை | வேகமான பிசிஆர்செயல்முறை |
சுழற்சிகள் |
கால அளவு | கால அளவு | |||
தலைகீழ்படியெடுத்தல் | 50℃ | 15 நிமிடம் | 5 நிமிடம் | பிடி |
பாலிமரேஸ்செயல்படுத்துதல் | 95℃ | 1-5 நிமிடம் | 1-2 நிமிடம் | பிடி |
டெனாச்சர் | 95℃ | 10-20 வி | 1-3 நொடி | 40-50 |
அனீலிங்/நீட்டிப்பு | 56-64℃ | 20-60 வி | 3-20 நொடி |
RT-qPCR திரவ எதிர்வினைஅயன் அமைப்பு
கலவை | 25µL தொகுதி | 50µL தொகுதி | செறிவு |
5×FastAmpli RT பஃபர் | 5µL | 10µL | 1× |
12.5×FastAmpli Part Taq/யுஎன்ஜி மிக்ஸ் (டிஎன்டிபிகளுடன்) | 2µL | 4µL | 1× |
50× FastAmpli பகுதி RTase | 0.5µL | 1µL | 1× |
4× லைப்ரோடெக்டண்ட் | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
25×ப்ரைமர்-புரோப் மிக்ஸ் | 1µL | 2µL | 1× |
டெம்ப்ளேட் ஆர்என்ஏ | — | — | — |
ddH2O | 25µL வரை | 50µL வரை | 1× |
1. இந்த அமைப்பு ஒரு lyophilization அமைப்பு;வாடிக்கையாளர்கள் இந்த அமைப்பை lyophilization தேவைகள் இல்லாமல் பயன்படுத்தும்போது, 4×lyoprotectant தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட முறையில் சேர்க்கப்படலாம்;லியோஃபிலைஸ் செய்யப்பட்ட தயாரிப்புகள் தேவைப்பட்டால், திரவ ரியாஜெண்டுகளின் நிலை தயாரிப்பு செயல்திறன் சரிபார்ப்பின் போது, லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட அமைப்பு கூறுகள் மற்றும் விளைவுகளுடன் நிலைத்தன்மையை உறுதிப்படுத்த 4×லைப்ரோடெக்டண்ட் சேர்க்க வேண்டும்.
2. வழக்கமான PCR செயல்முறையைப் பயன்படுத்தும் போது, ப்ரைமரின் இறுதி செறிவு பொதுவாக 0.2μM ஆகும்.சிறந்த முடிவுகளுக்கு, ப்ரைமர் செறிவை 0.2- 1.0μM வரம்பிற்குள் மேம்படுத்தலாம்.ஆய்வு செறிவு 0.1-0.3μM வரம்பிற்குள் உகந்ததாக இருக்கும்.ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுகளின் சிறந்த கலவையைக் கண்டறிய செறிவு சாய்வு சோதனைகள் செய்யப்படலாம்.
3. வேகமான PCR பெருக்க முறையைப் பயன்படுத்தும் போது, ப்ரைமர்/புரோப் செறிவு அதிகரிப்பதன் மூலம், ப்ரைமர் மற்றும் ப்ரோப்பின் சதவீதத்தை சரிசெய்வதன் மூலம் சிறந்த முடிவை அடைய முடியும்.
4. வெவ்வேறு வகையான வார்ப்புருக்கள் இலக்கு மரபணுவின் வெவ்வேறு நகல் எண்ணைக் கொண்டிருக்கின்றன.தேவைப்பட்டால், பொருத்தமான உகந்த டெம்ப்ளேட் கூட்டல் தொகையைத் தேர்ந்தெடுக்க, சாய்வு நீர்த்தலைச் செய்யலாம்.
லியோபிலைசேஷன் அமைப்பு தயாரித்தல்
கலவை | 25µL எதிர்வினை அமைப்பு |
5×FastAmpli RT பஃபர் | 5µL |
12.5×FastAmpli Part Taq/UNG மிக்ஸ் (dNTPகளுடன்) (DG) | 2µL |
50×FastAmpli பகுதி RTase (DG) | 0.5µL |
4×லியோபுரோடெக்டண்ட் | 6.25µL |
25×ப்ரைமர்-புரோப் மிக்ஸ் | 1µL |
ddH2O | 18~20µL வரை |
* லியோபிலைசேஷன் செய்ய பிற அமைப்புகள் தேவைப்பட்டால், தனித்தனியாகக் கலந்தாலோசிக்கவும்.
லியோபிலைசேஷன் ப்ரோக்ess
செயல்முறை | வெப்பநிலை | நேரம் | நிலை | அழுத்தம் |
உறைதல் | 4℃ | 30 நிமிடம் | பிடி | 1 ஏடிஎம் |
-50℃ | 60 நிமிடம் | குளிர்ச்சி | ||
-50℃ | 180 நிமிடம் | பிடி | ||
முதன்மை உலர்த்துதல் | -30℃ | 60 நிமிடம் | வெப்பமூட்டும் | அல்டிமேட் வெற்றிடம் |
-30℃ | 720 நிமிடம் | பிடி | ||
இரண்டாம் நிலை உலர்த்துதல் | 25℃ | 60 நிமிடம் | வெப்பமூட்டும் | அல்டிமேட் வெற்றிடம் |
25℃ | 300 நிமிடம் | பிடி |
1. இந்த லியோபிலைசேஷன் செயல்முறையானது 25µL வினைத்திறன் அமைப்புக்கான இடத்திலேயே உறைந்து உலர்த்தும் செயல்முறையாகும்;உறைதல்-உலர்த்துதல் மணிகள் அல்லது பிற இடத்திலேயே உறைதல்-உலர்த்துதல் செயல்முறைகள் தேவைப்பட்டால், தனித்தனியாக விசாரிக்கவும்.
2. மேலே உள்ள lyophilization செயல்முறை குறிப்புக்கு மட்டுமே.வெவ்வேறு தயாரிப்பு வகைகள் மற்றும் வெவ்வேறு முடக்கம்-உலர்த்திகள் வெவ்வேறு அளவுருக்களைக் கொண்டுள்ளன, எனவே பயன்பாட்டின் போது உண்மையான நிலைமைகளுக்கு ஏற்ப சரிசெய்தல்களைச் செய்யலாம்.
3. வெவ்வேறு லியோபிலைசேஷன் செயல்முறைகள் வெவ்வேறு தொகுதி அளவுகளில் உள்ள லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட தயாரிப்புகளுக்கு ஏற்றதாக இருக்கலாம், எனவே பெரிய அளவிலான உற்பத்திக்கு பயன்படுத்தப்படும் போது போதுமான சோதனை சரிபார்ப்பு செய்யப்பட வேண்டும்.
லியோபிலிஸைப் பயன்படுத்துவதற்கான வழிமுறைகள்எட் தூள்
1. lyophilized தூள் சுருக்கமாக மையவிலக்கு;
2. நியூக்ளிக் அமில வார்ப்புருவை லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட தூளில் சேர்த்து 25µL வரை தண்ணீரைச் சேர்க்கவும்;
3. மையவிலக்கு மூலம் நன்கு கலந்து இயந்திரத்தில் இயக்கவும்.
தர கட்டுப்பாடு
1. செயல்பாட்டு சோதனை: உணர்திறன், தனித்தன்மை, RT-qPCR இன் மறுஉருவாக்கம்.
2. எக்ஸோஜனஸ் நியூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லை, வெளிப்புற எண்டோ/எக்ஸோநியூக்லீஸ் மாசுபாடு இல்லை.
தொழில்நுட்ப தகவல்:
1. விரைவு டிஎன்ஏ பாலிமரேஸின் பெருக்க விகிதம் 1kb/10s க்கும் குறைவாக இல்லை.வெவ்வேறு PCR கருவிகள் வெவ்வேறு வெப்பமூட்டும் மற்றும் குளிரூட்டும் வேகம், வெப்பநிலை கட்டுப்பாட்டு முறைகள் மற்றும் வெப்ப கடத்துத்திறன் ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளன, எனவே உங்கள் ப்ரைமர்/ஆய்வு செறிவு மற்றும் உங்கள் குறிப்பிட்ட வேகமான PCR கருவியுடன் இணைந்து இயங்கும் முறையை மேம்படுத்துதல் அவசியம்.
2. ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் நேரம் பெருக்கப்பட வேண்டிய துண்டின் நீளத்திற்கு ஏற்ப உகந்ததாக இருக்கும்.நீண்ட துண்டுகளுக்கு, தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் நேரத்தை சரியான முறையில் நீட்டிக்க முடியும்.
3. ப்ரைமர் ஆய்வின் Tm மதிப்பு மற்றும் எதிர்வினையின் உண்மையான நிலைமைகளின் அடிப்படையில் அனீலிங் நீட்டிப்பு வெப்பநிலை உகந்ததாக இருக்க வேண்டும்.
4. குறைந்த அனீலிங் வெப்பநிலை அல்லது 200 பிபி துண்டுகளை விட நீளமான ப்ரைமர்களுக்கு, 3-படி முறை பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
5. பெருக்கத்திற்கு முன்னும் பின்னும் பிரத்யேக பகுதிகள் மற்றும் குழாய்களைப் பயன்படுத்தவும், கையுறைகளை அணிந்து அவற்றை அடிக்கடி மாற்றவும்;PCR தயாரிப்புகளால் மாதிரிகள் மாசுபடுவதைக் குறைக்க PCR எதிர்வினை முடிந்த பிறகு எதிர்வினைக் குழாயைத் திறக்க வேண்டாம்.
6. டியூடிபியின் பயன்பாட்டுத் திறன் மற்றும் யுஎன்ஜி நொதிக்கான உணர்திறன் ஆகியவை வெவ்வேறு இலக்கு மரபணுக்களுக்கு வேறுபடுகின்றன, எனவே யுஎன்ஜி அமைப்பைப் பயன்படுத்துவது கண்டறிதல் உணர்திறன் குறைவதற்கு வழிவகுத்தால், எதிர்வினை அமைப்பு சரிசெய்யப்பட்டு மேம்படுத்தப்பட வேண்டும்.தொழில்நுட்ப ஆதரவு தேவைப்பட்டால், எங்களை தொடர்பு கொள்ளவும்.