வைல்ட் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்
Taq DNA பாலிமரேஸ் என்பது தெர்மஸ் அக்வாடிகஸ் YT-1 இலிருந்து ஒரு தெர்மோஸ்டபிள் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் ஆகும், இது 5′→3′ பாலிமரேஸ் செயல்பாடு மற்றும் 5´ மடல் எண்டோநியூக்லீஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது.
கூறுகள்
| கூறு | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2×1 மிலி | 2×10 மிலி | 2×50 மிலி | 5×200 மிலி |
| Taq DNA பாலிமரேஸ் (5 U/μL) | 0.1 மி.லி | 1 மி.லி | 5 மி.லி | 5×10 மிலி |
சேமிப்பு நிலை
0°Cக்கு கீழ் போக்குவரத்து மற்றும் -25°C~-15°C இல் சேமிக்கப்படும்.
அலகு வரையறை
ஒரு அலகு 75 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 30 நிமிடங்களில் 15 nmol dNTP ஐ அமிலக் கரையாத பொருளில் இணைக்கும் நொதியின் அளவு என வரையறுக்கப்படுகிறது.
தர கட்டுப்பாடு
1.புரதத் தூய்மை மதிப்பீடு (SDS-PAGE):Taq DNA பாலிமரேஸின் தூய்மை ≥95% SDS-PAGE பகுப்பாய்வு மூலம் தீர்மானிக்கப்பட்டது.
2.Endஅணுக்கரு செயல்பாடு:37 ℃ இல் 16 மணிநேரத்திற்கு 1 μg λDNA உடன் குறைந்தபட்சம் 5 U Taq DNA பாலிமரேஸ் தீர்மானிக்கப்பட்டபடி கண்டறியக்கூடிய சிதைவை ஏற்படுத்தாது.
3.Exonuclease செயல்பாடு:1 μg λ -Hind Ⅲ டிஜெஸ்ட் டிஎன்ஏ 37 ℃ இல் 16 மணிநேரத்திற்கு குறைந்தபட்சம் 5 U Taq DNA பாலிமரேஸ் தீர்மானிக்கப்பட்டபடி கண்டறியக்கூடிய சிதைவை ஏற்படுத்தாது.
4.நிக்கேஸ் செயல்பாடு:குறைந்தபட்சம் 5 U Taq DNA பாலிமரேஸ் 1 μg pBR322 DNA உடன் 16 மணிநேரத்திற்கு 37°C இல் தீர்மானிக்கப்பட்டபடி கண்டறியக்கூடிய சிதைவை ஏற்படுத்தாது.
5.RNase செயல்பாடு:குறைந்தபட்சம் 5 U Taq DNA பாலிமரேஸ் 1.6 μg MS2 RNA உடன் 37°C இல் 16 மணிநேரத்திற்கு தீர்மானிக்கப்பட்டபடி கண்டறியக்கூடிய சிதைவை ஏற்படுத்தாது.
6.இ - கோலிடிஎன்ஏ:Taq DNA பாலிமரேஸின் 5 U, E. coli 16S rRNA லோக்கஸுக்குக் குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்களுடன் TaqMan qPCR ஐப் பயன்படுத்தி E. coli மரபணு DNA இருப்பதைத் திரையிடுகிறது.E. coli மரபணு DNA மாசுபாடு ≤1 நகல் ஆகும்.
7.PCR பெருக்கம் (5.0 kb Lambda DNA)- PCR பெருக்கத்தின் 25 சுழற்சிகளுக்கு 5 யூனிட் Taq DNA பாலிமரேஸ் உடன் 5 ng Lambda DNA கொண்ட 50 µL எதிர்வினை எதிர்பார்க்கப்படும் 5.0 kb உற்பத்தியில் விளைகிறது.
எதிர்வினை அமைப்பு
| கூறுகள் | தொகுதி |
| டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏa | விருப்பமானது |
| 10 μM ஃபார்வர்ட் ப்ரைமர் | 1 μL |
| 10 μM ரிவர்ஸ் ப்ரைமர் | 1 μL |
| dNTP கலவை (ஒவ்வொன்றும் 10mM) | 1 μL |
| 10× Taq தாங்கல் | 5 μL |
| Taq DNA பாலிமரேஸ்பி | 0.25 μL |
| அணுக்கரு இல்லாத நீர் | 50 μL வரை |
குறிப்புகள்:
1) வெவ்வேறு வார்ப்புருக்களின் உகந்த எதிர்வினை செறிவு வேறுபட்டது.பின்வரும் அட்டவணை 50 µL எதிர்வினை அமைப்பின் பரிந்துரைக்கப்பட்ட டெம்ப்ளேட் பயன்பாட்டைக் காட்டுகிறது.
| டிஎன்ஏ | தொகை |
| ஜீனோமிக் | 1 ng-1 μg |
| பிளாஸ்மிட் அல்லது வைரஸ் | 1 பக்-1 என்ஜி |
2) Taq DNA பாலிமரேஸின் உகந்த செறிவு சிறப்புப் பயன்பாடுகளில் 0.25 µL~1 µL வரை இருக்கலாம்.
எதிர்வினைநிரல்
| படி | வெப்ப நிலை(°C) | நேரம் | சுழற்சிகள் |
| ஆரம்ப நிலைமாற்றம்a | 95℃ | 5 நிமிடங்கள் | - |
| டினாடரேஷன் | 95℃ | 15-30 வி | 30-35 சுழற்சிகள் |
| அனீலிங்பி | 60℃ | 15 செ | |
| நீட்டிப்பு | 72℃ | 1kb/min | |
| இறுதி நீட்டிப்பு | 72℃ | 5 நிமிடங்கள் | - |
குறிப்புகள்:
1) ஆரம்பக் குறைப்பு நிலை பெரும்பாலான பெருக்க எதிர்வினைகளுக்கு ஏற்றது மற்றும் டெம்ப்ளேட் கட்டமைப்பின் சிக்கலான தன்மைக்கு ஏற்ப மாற்றியமைக்கப்படலாம்.டெம்ப்ளேட் அமைப்பு சிக்கலானதாக இருந்தால், ஆரம்ப டினாட்டரேஷன் விளைவை மேம்படுத்த 5 - 10 நிமிடங்களுக்கு முந்தைய நேரத்தை நீட்டிக்கலாம்.
2) ப்ரைமரின் Tm மதிப்பின்படி அனீலிங் வெப்பநிலை சரிசெய்யப்பட வேண்டும், இது பொதுவாக ப்ரைமரின் Tm மதிப்பை விட 3~5 ℃ குறைவாக அமைக்கப்படுகிறது;சிக்கலான வார்ப்புருக்களுக்கு, அனீலிங் வெப்பநிலையை சரிசெய்வது மற்றும் திறமையான பெருக்கத்தை அடைய நீட்டிப்பு நேரத்தை நீட்டிப்பது அவசியம்.
