5×நியோஸ்கிரிப்ட் ஃபாஸ்ட் RT-qPCR ப்ரீமிக்ஸ் பிளஸ்-UNG

பூனை எண்: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) என்பது ஒரு-படி தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் அளவு PCR (qRT-PCR) க்கு ஏற்ற மிகவும் நிலையான ஒரு குழாய் ஆய்வு அடிப்படையிலான கலவையாகும்.இது ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுகளின் முன் கலவையை ஆதரிக்கிறது மற்றும் குறைந்த வெப்பநிலையில் நீண்ட நேரம் சேமிப்பிற்குப் பிறகு நிலையாக இருக்கும்.கூடுதல் குழாய் திறப்பு/குழாய் இயக்கம் இல்லாமல், சோதனை செய்யப்படும் மாதிரியை நேரடியாகப் பயன்படுத்தும் போது சேர்க்கலாம்.இந்த தயாரிப்பு கூறுகளை வழங்குகிறது, எ.கா. ஹாட்-ஸ்டார்ட் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ், எம்-எம்எல்வி, ஹீட்-லேபிள் யுரேசில் டிஎன்ஏ கிளைகோசைலேஸ் (டிஎஸ்-யுஎன்ஜி), ஆர்நேஸ் இன்ஹிபிட்டர், எம்ஜிசிஎல்₂, dNTPs (dTTPக்கு பதிலாக dUTP உடன்), மற்றும் நிலைப்படுத்திகள்.மரபணு மாற்றப்பட்ட விரைவான பெருக்கம் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் மற்றும் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மூலம், PCR பெருக்கத்தை 20-40 நிமிடங்களுக்குள் முடிக்க முடியும்.இந்த மறுஉருவாக்கமானது qPCR க்கு தடுப்பு எதிர்ப்பு பெருக்க என்சைம் மற்றும் யுஎன்ஜி என்சைமின் கலப்பு நொதிகளுடன் சிறப்பு இடையகத்தைப் பயன்படுத்துகிறது.எனவே, இது இலக்கு மரபணுக்களின் நல்ல பெருக்கத்தைப் பெறலாம் மற்றும் PCR எஞ்சிய மற்றும் ஏரோசல் மாசுபாட்டால் ஏற்படும் தவறான பெருக்கத்தைத் தடுக்கலாம்.அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ், எப்பென்டார்ஃப், பயோ-ராட் மற்றும் ரோச் போன்ற உற்பத்தியாளர்களின் பெரும்பாலான ஃப்ளோரசன்ஸ் அளவு PCR கருவிகளுடன் இந்த மறுஉருவாக்கம் இணக்கமானது.

கூறு

1.25×நியோஸ்கிரிப்ட் ஃபாஸ்ட் RTase/UNG மிக்ஸ்

2.5×நியோஸ்கிரிப்ட் ஃபாஸ்ட் ஆர்டி பிரிமிக்ஸ் பஃபர் (dUTP)

களஞ்சிய நிலைமை

அனைத்து கூறுகளும் நீண்ட கால சேமிப்பிற்காக -20℃ மற்றும் 3 மாதங்கள் வரை 4℃ இல் வைக்கப்பட வேண்டும்.தயவு செய்து பயன்படுத்துவதற்கு முன் கரைத்து மற்றும் மையவிலக்கு செய்த பிறகு நன்கு கலக்கவும்.அடிக்கடி உறைந்துபோவதைத் தவிர்க்கவும்.

qRT-PCR எதிர்வினை அமைப்பு தயாரித்தல்

1) a.பிரைமரின் இறுதி செறிவு பொதுவாக 0.2μM ஆகும்.சிறந்த முடிவுகளுக்கு, ப்ரைமர் செறிவை 0.2-1μM வரம்பிற்குள் மேம்படுத்தலாம்.பொதுவாக, ஆய்வு செறிவு 0.1-0.3μM வரம்பிற்குள் உகந்ததாக இருக்கும்.

2) b. வேகமான PCR செயல்முறையைப் பயன்படுத்தும் போது, ​​ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுகளின் செறிவு அதிகரிப்பது சிறந்த பெருக்க முடிவுகளை ஏற்படுத்தலாம், மேலும் அவற்றின் விகிதம் அதற்கேற்ப மேம்படுத்தப்பட வேண்டும்.

3) வெவ்வேறு வகையான மாதிரிகள் வெவ்வேறு வகையான மற்றும் தடுப்பானின் உள்ளடக்கம் மற்றும் இலக்கு மரபணுவின் நகல் எண் ஆகியவற்றைக் கொண்டிருக்கின்றன.மாதிரி தொகுதி உண்மையான நிலையில் கருதப்பட வேண்டும்.தேவைப்பட்டால், மாதிரியை அணுக்கரு இல்லாத நீர் அல்லது TE பஃபர் மூலம் நீர்த்துப்போகச் செய்யவும்.

எதிர்வினை சிநிபந்தனைகள்

தர கட்டுப்பாடு

1.செயல்பாடு கண்டறிதல்: qPCR இன் உணர்திறன், தனித்தன்மை மற்றும் மீண்டும் மீண்டும்.

2.வெளிப்புற நியூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லை: வெளிப்புற எண்டோநியூக்லீஸ் மற்றும் எக்ஸோநியூக்லீஸ் மாசுபாடு இல்லை.

குறிப்புகள்

1.விரைவான டிஎன்ஏ பாலிமரேஸின் பெருக்க விகிதம் 1kb/10s க்கும் குறைவாக இல்லை.வெவ்வேறு PCR கருவிகள் வெவ்வேறு வெப்பமூட்டும் மற்றும் குளிரூட்டும் வேகம், வெப்பநிலை கட்டுப்பாட்டு முறைகள் மற்றும் வெப்ப கடத்துத்திறன் ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளன, இதனால் உங்கள் குறிப்பிட்ட வேகமான PCR கருவியுடன் இணைந்து உங்கள் ப்ரைமர்/ஆய்வு செறிவு மற்றும் இயங்கும் முறையை மேம்படுத்துதல் அவசியம்.

2.இந்த தயாரிப்பு பரவலான பொருந்தக்கூடிய தன்மையை செய்கிறது, மேலும் இது அதிக உணர்திறன் மூலக்கூறு நோயறிதலுக்கு ஏற்றது.மூன்று-படி பிசிஆர் முறை குறைந்த அனீலிங் வெப்பநிலை கொண்ட ப்ரைமர்களுக்கு அல்லது 200 பிபிக்கு மேல் நீளமான துண்டுகளை பெருக்குவதற்கு பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

3.வெவ்வேறு ஆம்பிளிகான்கள் dUTP இன் வெவ்வேறு பயன்பாட்டுத் திறன் மற்றும் UNG க்கு வெவ்வேறு உணர்திறன் ஆகியவற்றைக் கொண்டிருப்பதால், UNG அமைப்பைப் பயன்படுத்தும் போது கண்டறிதல் உணர்திறன் குறைந்தால், எதிர்வினைகள் உகந்ததாக இருக்க வேண்டும்.தேவைப்பட்டால் தொழில்நுட்ப ஆதரவுக்காக எங்களை தொடர்பு கொள்ளவும்.

4.கேரிஓவர் பிசிஆர் தயாரிப்புகளின் பெருக்கத்தைத் தவிர்க்க, பெருக்கத்திற்கு பிரத்யேக பரிசோதனை பகுதி மற்றும் பைப்பெட் தேவை.கையுறைகளுடன் இயக்கவும் மற்றும் அடிக்கடி மாற்றவும் மற்றும் பெருக்கத்திற்குப் பிறகு PCR குழாயைத் திறக்க வேண்டாம்.