RTL தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ்
ஆர்டிஎல் ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் என்பது ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட் சார்ந்த டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் ஆகும், இது 3'→5' எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லாதது மற்றும் ஆர்நேஸ் எச் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது.இந்த நொதி RNA ஐ ஒரு வார்ப்புருவாகப் பயன்படுத்தி டிஎன்ஏவின் நிரப்பு இழையை ஒருங்கிணைக்க முடியும், இது முதல் இழை cDNA தொகுப்புக்கு, குறிப்பாக RT-LAMPக்கு (லூப்-மத்தியஸ்த சமவெப்ப பெருக்கம்) பயன்படுத்தப்படலாம்.RTL ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் 1.0 உடன் ஒப்பிடும்போது, உணர்திறன் கணிசமாக மேம்படுத்தப்பட்டுள்ளது, வெப்ப நிலைத்தன்மை வலுவாக உள்ளது மற்றும் 65 ° C இல் எதிர்வினை மிகவும் நிலையானது.RTL ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் (கிளிசரால் இல்லாதது) lyophilized தயாரிப்புகள், lyophilized RT-LAMP reagents போன்றவற்றைத் தயாரிக்கப் பயன்படுத்தப்படலாம்.
அலகு வரையறை
ஒரு யூனிட் பாலி(A)•oligo(dT)25ஐ டெம்ப்ளேட்-ப்ரைமராகப் பயன்படுத்தி 20 நிமிடங்களில் 50 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 1 nmol dTTPஐ அமிலம்-வீழ்ச்சியடையக்கூடிய பொருளாகச் சேர்க்கிறது.
கூறுகள்
| கூறு | HC5008A-01 | HC5008A-02 | HC5008A-03 |
| RTL தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் (கிளிசரால் இல்லாதது) (15U/μL) | 0.1 மி.லி | 1 மி.லி | 10 மி.லி |
| 10×HC RTL தாங்கல் | 1.5 மி.லி | 4×1.5 மிலி | 5×10 மிலி |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 மி.லி | 2×1.5 மிலி | 3×10 மிலி |
சேமிப்பு நிலை
0°Cக்கு கீழ் போக்குவரத்து மற்றும் -25°C~-15°C இல் சேமிக்கப்படும்.
தர கட்டுப்பாடு
- எஞ்சிய செயல்பாடுEஅணுக்கரு1 μg λDNA மற்றும் 15 யூனிட் RTL2.0 ஆகியவற்றைக் கொண்ட 50 μL வினையானது 37 ℃ இல் 16 மணி நேரம் அடைகாக்கப்பட்டது, ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் எதிர்மறைக் கட்டுப்பாட்டின் அதே மாதிரியைக் காட்டுகிறது.
- எஞ்சிய செயல்பாடுExonuclease:1 μg ஹிந்த் Ⅲ செரிக்கப்பட்ட λDNA மற்றும் 15 யூனிட் RTL2.0 ஆகியவற்றைக் கொண்ட 50 μL வினையானது 16 மணி நேரம் 37 ℃ இல் அடைகாத்தது ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் எதிர்மறைக் கட்டுப்பாட்டின் அதே மாதிரியைக் காட்டுகிறது.
- எஞ்சிய செயல்பாடுநிக்கேஸ்:1 μg supercoiled pBR322 மற்றும் 15 யூனிட் RTL2.0 ஆகியவற்றைக் கொண்ட 50 μL வினையானது 4 மணி நேரம் 37°C இல் அடைகாப்பது ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் எதிர்மறைக் கட்டுப்பாட்டின் அதே வடிவத்தைக் காட்டுகிறது.
- எஞ்சிய செயல்பாடுRNase:ஒரு 10 μL எதிர்வினை 0.48 μg MS2 RNA மற்றும் 15 அலகுகள் RTL2.0 4 மணி நேரம் 37 ° C இல் அடைகாப்பது ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் எதிர்மறையான கட்டுப்பாட்டைக் காட்டுகிறது.
- இ - கோலி gடிஎன்ஏ:உடன் அளவிடப்படுகிறதுஇ - கோலிகுறிப்பிட்ட எச்சிடி கண்டறிதல் கருவிகள்，ஆர்டிஎல்2.0 இன் 15 யூனிட்கள் 1க்கும் குறைவானவைஇ - கோலிமரபணு
எதிர்வினை அமைப்பு
cDNA தொகுப்பு நெறிமுறை
| கூறுகள் | தொகுதி |
| டெம்ப்ளேட் RNA a | விருப்பமானது |
| ஒலிகோ(dT) 18~25(50uM) அல்லது ரேண்டம் ப்ரைமர் கலவை(60uM) | 2 μL |
| dNTP கலவை (ஒவ்வொன்றும் 10mM) | 1 μL |
| RNase இன்ஹிபிட்டர் (40U/uL) | 0.5 μL |
| RTL ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் 2.0 (15U/uL) | 0.5 μL |
| 10×HC RTL தாங்கல் | 2 μL |
| அணுக்கரு இல்லாத நீர் | 20 μL வரை |
குறிப்புகள்:
1) மொத்த RNA இன் பரிந்துரைக்கப்பட்ட அளவு 1ng~1μg ஆகும்
2) mRNAயின் பரிந்துரைக்கப்பட்ட அளவு 50ng~100ng
தெர்மோ-ஒரு வழக்கமான சைக்கிள் ஓட்டுதல் நிபந்தனைகள் எதிர்வினை:
| வெப்பநிலை (°C) | நேரம் |
| 25 °Ca | 5 நிமிடங்கள் |
| 55 °C | 10 நிமிடங்கள்b |
| 80 °C | 10 நிமிடங்கள் |
குறிப்புகள்:
1) ரேண்டம் ப்ரைமர் கலவை பயன்படுத்தப்பட்டால், 25°C வெப்பநிலையில் அடைகாக்கும் படி.
2) இலக்கு ப்ரைமர் கலவை பயன்படுத்தப்பட்டால், 10~30 நிமிடங்களுக்கு 55°C வெப்பநிலையில் அடைகாக்கும் படி.
RT-LAMP புரோட்டோகால்
| கூறுகள் | தொகுதி | இறுதி செறிவு |
| டெம்ப்ளேட் ஆர்என்ஏ | விருப்பமானது | ≥10 பிரதிகள் |
| டிஎன்டிபி கலவை (10மிமீ) | 3.5 μL | 1.4 மி.மீ |
| FIP/BIP ப்ரைமர்கள் (25×) | 1 μL | 1.6 μM |
| F3/B3 ப்ரைமர்கள் (25×) | 1 μL | 0.2 μM |
| LoopF/LoopB ப்ரைமர்கள் (25×) | 1 μL | 0.4 μM |
| RNase இன்ஹிபிட்டர் (40U/μL) | 0.5 μL | 20 U/எதிர்வினை |
| RTL ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் 2.0 (15U/μL) | 0.5 μL | 7.5 U/எதிர்வினை |
| Bst V2 DNA பாலிமரேஸ் (8U/μL) | 1 μL | 8 U/எதிர்வினை |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL | 6 மிமீ (மொத்தம் 8 மிமீ) |
| 10×HC RTL தாங்கல் (அல்லது 10×HC Bst V2 இடையக) | 2.5 μL | 1 × (2mM Mg2+) |
| அணுக்கரு இல்லாத நீர் | 25 μL வரை | - |
குறிப்புகள்:
1) சுழல் மூலம் கலக்கவும் மற்றும் சேகரிக்க சுருக்கமாக மையவிலக்கு.1 மணிநேரத்திற்கு 65 டிகிரி செல்சியஸில் நிலையான வெப்பநிலை அடைகாத்தல்.
2) இரண்டு இடையகங்களும் ஒன்றோடொன்று இயங்கக்கூடியவை மற்றும் ஒரே கலவையைக் கொண்டுள்ளன.
குறிப்புகள்
1.இந்தப் பொருள் -20 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் சேமிக்கப்படும் போது வெண்மையான திடப்பொருளை உருவாக்கும்.-20 ° C இலிருந்து வெளியே எடுத்து சுமார் 10 நிமிடங்கள் பனியில் வைக்கவும்.உருகிய பின் குலுக்கி கலக்கி பயன்படுத்தலாம்.
2.சிடிஎன்ஏ தயாரிப்பை -20°C அல்லது -80°C இல் சேமிக்கலாம் அல்லது PCR எதிர்வினைக்கு உடனடியாகப் பயன்படுத்தலாம்.
3.RNase மாசுபடுவதைத் தடுக்க, பரிசோதனைப் பகுதியைச் சுத்தமாக வைத்திருக்கவும், செயல்பாட்டின் போது சுத்தமான கையுறைகள் மற்றும் முகமூடிகளை அணியவும்.
