உயர் மகசூல் T7 இன் விட்ரோ டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ரீஜென்ட் (தெர்மோஸ்டபிள்)
உயர்-விளைச்சல் T7 இன் விட்ரோ டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ரீஜென்ட் கிட் (தெர்மோஸ்டபிள்) 50 டிகிரி செல்சியஸ் வரை அதிக வெப்பநிலையில் விட்ரோ டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் திறன் கொண்டது.T7 ஊக்குவிப்பாளரை டெம்ப்ளேட்டாகவும், NTP களை அடி மூலக்கூறாகவும் கொண்ட லீனியர் டபுள்-ஸ்ட்ரான்டட் டிஎன்ஏவைப் பயன்படுத்தி அதிக மகசூல் தரக்கூடிய ஆர்என்ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்டுகளை ஒருங்கிணைக்கும் திறன் கொண்டது.பயோட்டின் லேபிளிடப்பட்ட, சாயம் லேபிளிடப்பட்ட மற்றும் ரேடியோலேபிளிடப்பட்ட ஆர்என்ஏவைப் பெறுவதற்கு மாற்றியமைக்கப்பட்ட நியூக்ளியோடைடுகளை இணைப்பதற்கு இந்த கருவி பொருத்தமானது.கேப் அனலாக்ஸுடன் இணை-டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனலி கேப்பிங் எம்ஆர்என்ஏக்களின் தொகுப்பிலும் கிட் பயன்படுத்தப்படலாம்.கிட்டில் மாற்றியமைக்கப்பட்ட நியூக்ளியோடைடுகள் N1-Me-pUTP உள்ளது.
ஒவ்வொரு நிலையான எதிர்வினையும் 1μg டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டிலிருந்து 150-200 μg ஆர்என்ஏ வரை அளிக்கிறது.தேவைக்கேற்ப மில்லிகிராம் அளவிலான ஆர்.என்.ஏ.வை விளைவிக்க எதிர்வினை அளவை அளவிடலாம்.
RNA அமைப்பு மற்றும் செயல்பாட்டு ஆய்வுகள், ரைபோசைம் உயிர்வேதியியல், RNase பாதுகாப்பு மதிப்பீடுகள் மற்றும் கலப்பின அடிப்படையிலான கறைகள், ஆன்டி-சென்ஸ் ஆர்என்ஏ மற்றும் ஆர்என்ஏஐ பரிசோதனை உள்ளிட்ட பல பயன்பாடுகளுக்கு கிட்டில் இருந்து தொகுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ பொருத்தமானது.கருவியில் இருந்து தொகுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ, தடுப்புமருந்து கேப்பிங் என்சைம் மற்றும் 2'-ஓ-மெதில்ட்ரான்ஸ்ஃபெரேஸ் மூலம் மூடிய ஆர்என்ஏவின் நொதி உற்பத்தியை உற்பத்தி செய்வதற்கும், விட்ரோ மொழிபெயர்ப்பில் பயன்படுத்தப்படும் ஆர்என்ஏவின் நிலைத்தன்மை மற்றும் மொழிபெயர்ப்புத் திறனை மேம்படுத்த பாலி(ஏ) பாலிமரேஸுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளது. , இடமாற்றம் மற்றும் நுண்ணுயிர் ஊசி.
கூறுகள்
கூறு | செறிவு | தொகுதி |
ஏடிபி | 100 மி.மீ | 100 μL |
CTP | 100 மி.மீ | 100 μL |
ஜிடிபி | 100 மி.மீ | 100 μL |
யுடிபி | 100 மி.மீ | 100 μL |
N1-Me-pUTP | 100 மி.மீ | 100 μL |
10 × அதிக மகசூல் IVT தாங்கல் A | / | 100 μL |
என்சைம் கலவை (தெர்மோஸ்டபிள்) | / | 100 μL |
களஞ்சிய நிலைமை
0°Cக்கு கீழ் போக்குவரத்து மற்றும் சேமிப்பு -25~- 15°C.
நெறிமுறை
•டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட் தயாரிப்பு
லீனியர் செய்யப்பட்ட பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ, பிசிஆர் தயாரிப்புகள் அல்லது செயற்கை டிஎன்ஏ ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகள் கிட் மூலம் விட்ரோ டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனுக்கான டெம்ப்ளேட்டுகளாகப் பயன்படுத்தப்படலாம். டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டை TE பஃபர் அல்லது RNase-free ddH2O இல் கரைக்கலாம்.
•பிளாஸ்மிட் வார்ப்புருக்கள்: லீனியர்ஸ் செய்யப்பட்ட பிளாஸ்மிட் டி.என்.ஏ டெம்ப்ளேட்டாக டி7 ப்ரோமோட்டர் பகுதியைக் கொண்டிருக்க வேண்டும்.நேர்கோட்டு பிளாஸ்மிட்டின் தரம் ஆர்என்ஏவின் விளைச்சலையும் ஒருமைப்பாட்டையும் பாதிக்கிறது.கிட்டின் வெற்றிகரமான பயன்பாட்டிற்கு முற்றிலும் நேர்கோட்டுப்படுத்தப்பட்ட பிளாஸ்மிட் வார்ப்புரு மிகவும் முக்கியமானது, ஏனெனில் வட்ட பிளாஸ்மிட் திறம்பட நிறுத்தப்படவில்லை.மிக உயர்ந்த தூய்மையான டெம்ப்ளேட்டைக் கொண்டு அதிக டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் விளைச்சல் அடையப்படுகிறது.வரையறுக்கப்பட்ட நீளத்தின் ஆர்என்ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்டை உருவாக்க, பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ ஒரு கட்டுப்பாட்டு நொதியுடன் முற்றிலும் நேர்கோட்டாக இருக்க வேண்டும், அது மழுங்கிய முனைகள் அல்லது 5'-ஓவர்ஹாங்க்களை உருவாக்குகிறது.ஆய்வக முறைகளால் சுத்திகரிக்கப்பட்ட நேரியல் பிளாஸ்மிட் RNase, புரதம், RNA மற்றும் உப்புகளை மாசுபடுத்துவதிலிருந்து விடுபடலாம்.
• PCR வார்ப்புருக்கள்: சரியான நோக்குநிலையில் T7 RNA பாலிமரேஸ் ஊக்குவிப்பாளரைக் கொண்ட PCR தயாரிப்புகள் படியெடுக்கப்படலாம்.பிசிஆர் கலவைகளை நேரடியாகப் பயன்படுத்தலாம் என்றாலும், சுத்திகரிக்கப்பட்ட பிசிஆர் தயாரிப்புகள் மூலம் சிறந்த மகசூல் கிடைக்கும்.
•செயற்கை டிஎன்ஏ ஒலிகான்யூக்ளியோடைடுகள்:செயற்கை டிஎன்ஏ ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகள் முழுக்க முழுக்க இரட்டை இழைகள் அல்லது பெரும்பாலும் ஒற்றை இழைகள் கொண்ட இரட்டை இழைகள் கொண்ட T7 ஊக்குவிப்பாளர் வரிசையுடன் படியெடுக்கப்படலாம்.
ஆர்என்ஏ தொகுப்பு நெறிமுறைகள்
RNase மாசுபடுவதைத் தவிர்க்க கையுறைகளை அணிவது மற்றும் நியூக்லீஸ் இல்லாத குழாய்கள் மற்றும் ரியாஜெண்டுகளைப் பயன்படுத்துவது கடுமையாக பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.சிறிய அளவிலான எதிர்வினைகள் அணுக்கரு இல்லாத மைக்ரோஃபியூஜ் குழாய்கள் அல்லது PCR துண்டு குழாய்களில் சேகரிக்கப்பட வேண்டும்.
வழக்கமான ஆர்என்ஏ தொகுப்பு
1.குழாயின் அடிப்பகுதிக்கு தீர்வுகளை சேகரிக்க மைக்ரோஃபியூஜில் தேவையான கிட் கூறுகளை கரைத்து, மிக்ஸ் மற்றும் பல்ஸ்-ஸ்பின்.பனியில் வைக்கவும்.
2.நீங்கள் பல எதிர்வினைகளை இயக்க திட்டமிட்டால், 10× ஹை-ஈல்டு IVT பஃபர் மற்றும் நான்கு ரிபோநியூக்ளியோடைடு (NTP) தீர்வுகளின் சம அளவுகளை இணைத்து ஒரு மாஸ்டர் கலவையை தயாரிப்பது வசதியானது.ஒரு எதிர்வினைக்கு 10 μl மாஸ்டர் கலவையைப் பயன்படுத்தவும்.
3. பின்வரும் வரிசையில் அறை வெப்பநிலையில் எதிர்வினையைச் சேகரிக்கவும்:
வினைப்பொருள் | தொகை |
அணுக்கரு இல்லாத நீர் | X μL |
10 × அதிக மகசூல் IVT தாங்கல் A | 2 μL |
ATP/CTP/GTP/UTP *(ஒவ்வொன்றும் 100 mM) | 2 μL ஒவ்வொன்றும் (10 mM ஒவ்வொரு இறுதி) |
டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏ | Y μL (1 μg) |
என்சைம் கலவை (தெர்மோஸ்டபிள்) | 2 μL |
மொத்த எதிர்வினை அளவு | 20 μL |
* தயாரிப்பின் நோயெதிர்ப்புத் திறனைக் குறைக்க, UTP ஐ அதே இறுதி செறிவில் N1-Me-pUTP ஆல் மாற்றலாம்.
4. மைக்ரோஃபியூஜில் நன்கு கலக்கவும், பல்ஸ்-ஸ்பின்.37 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 2 மணிநேரம் அல்லது 50 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் அதிக வெப்பநிலை எதிர்வினை தேவைப்பட்டால் 1 மணிநேரத்திற்கு அடைகாக்கவும்.
5. டிஎன்ஏ செரிமானம்: டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏவை அகற்ற, ஒவ்வொரு 20 μL எதிர்வினைக்கும் 10யூ டிநேஸ் ஐ சேர்த்து, நன்கு கலந்து 37℃ 30 நிமிடங்களுக்கு அடைகாக்கவும்.
மூடிய RNA தொகுப்பு
வழக்கமான ஆர்என்ஏ தொகுப்புக்கு ஒத்த நெறிமுறை, எதிர்வினையை அசெம்பிள் செய்யும் படி தவிர.அறை வெப்பநிலையில் மூடிய RNA தொகுப்பின் எதிர்வினையை பின்வரும் வரிசையில் இணைக்கவும்:
வினைப்பொருள் | தொகை |
அணுக்கரு இல்லாத நீர் | X μL |
10 × அதிக மகசூல் IVT தாங்கல் A | 2 μL |
ATP/CTP/GTP/UTP *(ஒவ்வொன்றும் 100 mM) | ஒவ்வொன்றும் 2 μL (10 mM ஒவ்வொரு இறுதி) |
கேப் அனலாக் (100 மிமீ) | 1.6 μL |
டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏ | Y μL (1 μg) |
என்சைம் கலவை (தெர்மோஸ்டபிள்) | 2 μL |
மொத்த எதிர்வினை அளவு | 20 μL |
*** தேவைப்பட்டால், Cap1(3'OH AG) மற்றும் cap1(3'OMe AG) ஆகியவை ascap அனலாக்ஸைப் பயன்படுத்தலாம்.எங்கள் இணை-டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ரியாஜென்ட் கோ-கேப்பிங் T7 இன்விட்ரோ டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ரியாஜென்ட் (pUTP, CAP GAG (3'OMe) , pUTP, CAP GAG, N1-Me- pUTP, CAP GAG (3'OMe) மற்றும் N1-Me-pUTP, CAP ஆகியவற்றைப் பரிந்துரைக்கிறோம் GAG.
mRNA சுத்திகரிப்பு
• பீனால்: குளோரோஃபார்ம் எக்ஸ்ட்ராசெயல் மற்றும் எத்தனால் மழைப்பொழிவு
புரதங்கள் மற்றும் பெரும்பாலான இலவச நியூக்ளியோடைடுகளை அகற்றுவதற்கு, ஃபீனால்: குளோரோஃபார்ம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் ஆர்என்ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்டுகளின் எத்தனால் மழைப்பொழிவு ஆகியவை விருப்பமான முறையாகும்.
1.160 μL அணுக்கரு இல்லாத தண்ணீரைச் சேர்த்து எதிர்வினை அளவை 180 μL ஆகச் சரிசெய்யவும்.20 μL 3M சோடியம் அசிடேட், pH5.2 சேர்த்து நன்கு கலக்கவும்.
2. 1:1 phenol/ குளோரோஃபார்ம் கலவையின் சம அளவுடன் பிரித்தெடுக்கவும், 5 நிமிடங்களுக்கு 10000 rpm இல் மையவிலக்கு.நீர்நிலையை சேகரித்து புதிய குழாய்க்கு மாற்றவும்.
3. சம அளவு குளோரோஃபார்ம் கொண்ட இரண்டு பிரித்தெடுத்தல்களைத் தொடர்ந்து.நீர்நிலையை சேகரித்து புதிய குழாய்க்கு மாற்றவும்.
4. ஆர்என்ஏ 2 தொகுதிகள் எத்தனால் மூலம் துரிதப்படுத்தப்பட்டது.குறைந்தபட்சம் 30 நிமிடங்களுக்கு -20℃ இல் அடைகாக்கவும், 15 நிமிடங்களுக்கு மையவிலக்கு மூலம் தட்டுகளை சேகரிக்கவும்.மேலோட்டத்தை கவனமாக அகற்றவும்.
5. 150 μL~200 μL குளிர்ந்த 70% எத்தனால் கொண்டு பேலட்டை துவைக்கவும்.
6. பேலட்டை 2 நிமிடங்களுக்கு காற்றில் உலர்த்தி, 100 μL~200 μL RNase-இல்லாத நீர் அல்லது பிற பஃபர்களில் மீண்டும் இணைக்கவும்.
• LiCl மழைப்பொழிவு
ஆர்என்ஏவின் LiCl மழைப்பொழிவு பெரும்பாலான இணைக்கப்படாத NTPகள் மற்றும் என்சைம்களை அகற்றுவதில் பயனுள்ளதாக இருக்கும்.
1. சம அளவு LiCl கரைசலை (5M) சேர்த்து, நன்கு கலக்கவும்.
2. குறைந்தது 30 நிமிடங்களுக்கு -20℃ இல் அடைகாக்கவும்.15 நிமிடங்களுக்கு 12000 ஆர்பிஎம்மில் 4℃ இல் மையவிலக்கு ஆர்என்ஏவைத் தட்டவும்.மேலோட்டத்தை கவனமாக அகற்றவும்.
3. 200 μL ப்ரீகூலிங் 70% எத்தனாலைச் சேர்ப்பதன் மூலம் பேலட்டை பிசின் செய்யவும்.எத்தனாலை கவனமாக அகற்றவும்.2-3 முறை படிகளை மீண்டும் செய்யவும்.
5.
• சுழல் நெடுவரிசை சுத்திகரிப்பு
சுழல் நெடுவரிசைகள் இணைக்கப்படாத NTPகள், புரதங்கள் மற்றும் உப்புகளை அகற்றும்.
• காந்த மணி பூரிபுனைகதை
காந்த மணி சுத்திகரிப்பு இணைக்கப்படாத நியூக்ளியோடைடுகள், புரதங்கள் மற்றும் உப்புகளை அகற்றும்.
எதிர்வினை தயாரிப்புகளின் அளவு
• யூ மூலம் அளவீடுV ஒளி உறிஞ்சுதல்: எதிர்வினை தயாரிப்புகளுக்கு சுத்திகரிப்பு தேவைப்படுகிறது, ஏனெனில் எதிர்வினை கலவைகளில் உள்ள இணைக்கப்படாத நியூக்ளியோடைடுகள் மற்றும் டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏ ஆகியவை வாசிப்பைப் பாதிக்கும்.UV ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமெட்ரியை 260 nm இல் அளவிடுவதன் மூலம் RNA செறிவை எளிதாகப் பெறலாம்.ஒற்றை இழையுடைய RNAக்கு, 1 A260 ஆனது 40 μg/mL என்ற RNA செறிவுக்கு ஒத்திருக்கிறது.
• அளவீடு by சாயம்ரிபோக்ரீன் சாயத்தை சுத்திகரிக்காமலேயே எதிர்வினை தயாரிப்புகளின் அளவைப் பயன்படுத்தலாம், ஏனெனில் இணைக்கப்படாத நியூக்ளியோடைடுகள் ஆர்என்ஏ தயாரிப்புகளின் மதிப்பீட்டைப் பாதிக்காது.
குறிப்புகள்
• டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் எதிர்வினை RNase இல்லாத சூழலில் செய்யப்பட வேண்டும்.கையுறைகளை அணிவது நல்லது.குறிப்புகள், குழாய்கள் மற்றும் நீர் அணுக்கரு இல்லாததாக இருக்க வேண்டும்.
• NTP களின் அனைத்து உகந்த இறுதி செறிவு 10 mM ஆகும், மேலும் NTPகளின் இறுதி செறிவை உண்மையான நிலைக்கு ஏற்ப மாற்றலாம்.
• ஆர்என்ஏ தொகுப்பு எதிர்வினை கலவையை அறை வெப்பநிலையில் தயாரிக்க வேண்டும், ஏனெனில் டிஎன்ஏ 4 டிகிரி செல்சியஸில் ஸ்பெர்மிடின் முன்னிலையில் படியக்கூடும்.
• டிஎன்ஏ வார்ப்புரு முழுமையடையாமல் நேர்கோட்டாக இருந்தால், சரியான நீள டிரான்ஸ்கிரிப்டுகளின் விளைச்சல் குறைகிறது.
• எதிர்வினை கலவையை மேலே அல்லது கீழே அளவிடலாம்.
• கரையாத பொருட்கள் பயன்பாட்டிற்கு முன் முற்றிலும் கரையும் வரை இடையகத்தை கலக்கவும், மீண்டும் உருகிய பிறகு கரையாத பொருட்கள் இருப்பது கண்டறியப்பட்டால்.
• 300 bp க்கும் குறைவான டிரான்ஸ்கிரிப்ட்களைக் கொண்ட எதிர்வினைகளுக்கு, 37 ℃ இல் 4-8 மணிநேர அடைகாத்தல் உங்களுக்கு அதிக மகசூலைத் தரும்.
• நிலையான ஆர்என்ஏ தொகுப்பு டிரான்ஸ்கிரிப்டுகளுக்குப் பயன்படுத்தப்படும் டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டில் டி7 ஊக்குவிப்பாளர் வரிசையும் அதைத் தொடர்ந்து ஜிஜிஜி துவக்க வரிசையும் இருக்க வேண்டும், ஏனெனில் டி7 ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸ் ஜிடிபியுடன் அதிக ஈடுபாட்டைக் கொண்டுள்ளது.
• இணை-டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் அமைப்புடன் எம்ஆர்என்ஏ தொகுப்புக்காகப் பயன்படுத்தப்படும் டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட், ஏஜிஜி துவக்க வரிசையைத் தொடர்ந்து டி7 ஊக்குவிப்பாளர் வரிசையைக் கொண்டிருக்க வேண்டும்.
பழுது நீக்கும்
a) முழு லெனின் குறைந்த மகசூல்gth RNA:
டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் எதிர்வினை முழு நீள ஆர்என்ஏவை உருவாக்குகிறது, ஆனால் மகசூல் எதிர்பார்த்ததை விட கணிசமாகக் குறைவாக இருந்தால், டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டில் உள்ள அசுத்தங்கள் ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸைத் தடுக்கலாம் அல்லது டிஎன்ஏ செறிவு மிகவும் குறைவாகவோ அல்லது தவறாகவோ இருக்கலாம்.
பரிந்துரை: டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டின் கூடுதல் சுத்திகரிப்பு பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
b) ஆர்.என்.ஏ தமிழாக்கம் மீது தடவுதல் டெனாட்சிறுநீர் கழித்தல் ஜெல்:
அகரோஸ் அல்லது பாலிஅக்ரிலாமைடு ஜெல்லைக் குறைப்பதில் ஆர்என்ஏ சிதைந்ததாகத் தோன்றினால், டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட் அல்லது பரிசோதனை செயல்முறை RNase உடன் மாசுபட்டது.
பரிந்துரை: பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட் RNase உடன் மாசுபட்டிருந்தால், பீனால்/குளோரோஃபார்ம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் எத்தனால் படிவு ஆகியவற்றைச் செய்யவும்.சோதனையின் போது பயன்படுத்தப்படும் உதவிக்குறிப்புகள் மற்றும் குழாய்கள் RNase-இல்லாதவை என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்.ஆய்வக கோட், முகமூடி மற்றும் செலவழிப்பு கையுறைகளை அணியவும்.
c) ஆர்.என்.ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்ட் எதிர்பார்த்ததை விட பெரிய அளவு:
ஆர்என்ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்ட் எதிர்பார்த்ததை விட பெரியதாக தோன்றினால், பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட் முழுமையடையாமல் செரிக்கப்படலாம்.வலுவான இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்புகள் இருப்பதால், ஆர்என்ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்ட் முழுவதுமாக சிதைக்கப்படாமல் இருக்கலாம்.
பரிந்துரை: முழுமையான செரிமானத்திற்கான டெம்ப்ளேட்டைச் சரிபார்க்கவும், செரிக்கப்படாத பிளாஸ்மிட் உறுதிசெய்யப்பட்டால், மீண்டும் கட்டுப்படுத்தும் நொதி செரிமானம்.டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டின் இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்புகளை வரிசை வடிவமைப்பின் கட்டத்தில் குறைக்கவும்.
d) ஆர்.என்.ஏ தமிழாக்கம் இன் சிறியது அளவு விட எதிர்பார்க்கப்படுகிறது:
ஜெல் பகுப்பாய்வை நீக்குவது எதிர்பார்த்த அளவை விட சிறிய பட்டைகள் இருப்பதைக் காட்டினால், அது பாலிமரேஸால் முன்கூட்டியே நிறுத்தப்பட்டதன் காரணமாக இருக்கலாம்.T7 RNA பாலிமரேஸ் முடிவு சிக்னல்களை ஒத்திருக்கும் சில வரிசைகள் முன்கூட்டியே நிறுத்தத்தை ஏற்படுத்தும்.
பரிந்துரை: குறைந்த வெப்பநிலையில் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் வினையை அடைகாப்பது, உதாரணமாக 30 டிகிரி செல்சியஸ், முழு நீள டிரான்ஸ்கிரிப்ட்டின் விகிதத்தை அதிகரிக்கலாம், இருப்பினும் மகசூல் குறையும்.GC பணக்கார வார்ப்புருக்கள் அல்லது இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்புகள் கொண்ட டெம்ப்ளேட்டுகளுக்கு, 42°C இல் அடைகாத்தல் முழு நீள டிரான்ஸ்கிரிப்ட்டின் விளைச்சலை மேம்படுத்தலாம்.