ஒரு படி வேகமான RT-qPCR ஆய்வு Premix-UNG
பூனை எண்: HCR5143A
ஒன் ஸ்டெப் RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) என்பது ஆய்வு அடிப்படையிலான RT-qPCR விரைவு கண்டறிதல் கருவியாகும், இது RNA ஐ டெம்ப்ளேட்டாகப் பயன்படுத்தி (RNA வைரஸ் போன்றவை) சிங்கிள்-ப்ளெக்ஸ் அல்லது மல்டிபிளக்ஸ் அளவு PCRக்கு ஏற்றது.இந்த தயாரிப்பு புதிய தலைமுறை ஆன்டிபாடி-மாற்றியமைக்கப்பட்ட Taq DNA பாலிமரேஸ் மற்றும் ஒரு-படி அர்ப்பணிக்கப்பட்ட தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்துகிறது, விரைவான பெருக்கத்திற்கான உகந்த இடையகத்துடன், இது வேகமான பெருக்க வேகம், அதிக பெருக்க செயல்திறன் மற்றும் தனித்துவம் கொண்டது.இது குறைந்த மற்றும் அதிக செறிவு கொண்ட மாதிரிகளின் ஒற்றை-பிளெக்ஸ் மற்றும் மல்டிபிளக்ஸ் இரண்டிலும் சமச்சீர் பெருக்கத்தை குறுகிய காலத்தில் ஆதரிக்கிறது.
கூறுகள்
1. 5×RT-qPCR இடையக (U+)
2. என்சைம் கலவை (U+)
குறிப்புகள்:
அ.5×RT-qPCR தாங்கல் (U+) dNTP மற்றும் Mg ஆகியவற்றை உள்ளடக்கியது2+;
பி.என்சைம் கலவையில் (U+) ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ், ஹாட் ஸ்டார்ட் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ், ஆர்நேஸ் இன்ஹிபிட்டர் மற்றும் யுடிஜி ஆகியவை அடங்கும்;
c.RNase-இலவச உதவிக்குறிப்புகள், EP குழாய்கள் போன்றவற்றைப் பயன்படுத்தவும்.
பயன்படுத்துவதற்கு முன், 5×RT-qPCR இடையகத்தை (U+) நன்கு கலக்கவும்.கரைந்த பிறகு மழைப்பொழிவு ஏற்பட்டால், இடையக அறை வெப்பநிலைக்குத் திரும்புவதற்குக் காத்திருந்து, கலந்து கரைத்து, பின்னர் அவற்றை சாதாரணமாகப் பயன்படுத்தவும்.
களஞ்சிய நிலைமை
தயாரிப்பு உலர்ந்த பனியுடன் அனுப்பப்படுகிறது மற்றும் 1 வருடத்திற்கு -25~-15℃ இல் சேமிக்கப்படும்.
வழிமுறைகள்
1. எதிர்வினை அமைப்பு
| கூறுகள் | தொகுதி (20 μL எதிர்வினை) |
| 2 × RT-qPCR இடையக | 4μL |
| என்சைம் கலவை (U+) | 0.8μL |
| ப்ரைமர் ஃபார்வர்டு | 0.1~ 1.0μM |
| ப்ரைமர் தலைகீழ் | 0.1~ 1.0μM |
| தக்மான் ஆய்வு | 0.05~0.25μM |
| டெம்ப்ளேட் | X μL |
| RNase-இலவச நீர் | 25μL வரை |
குறிப்புகள்: எதிர்வினை அளவு 10-50μL.
2. சைக்கிள் ஓட்டுதல் நெறிமுறை (எஸ்tandard)
| மிதிவண்டி படி | வெப்பநிலை | நேரம் | சுழற்சிகள் |
| தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் | 55℃ | 10 நிமிடம் | 1 |
| ஆரம்ப நிலைமாற்றம் | 95℃ | 30 நொடி | 1 |
| டினாடரேஷன் | 95℃ | 10 நொடி | 45 |
| அனீலிங்/நீட்டிப்பு | 60℃ | 30 நொடி |
| சைக்கிள் ஓட்டுதல் நெறிமுறை (வேகமாக) மிதிவண்டி படி |
வெப்பநிலை |
நேரம் |
சுழற்சிகள் |
| தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் | 55℃ | 5 நிமிடம் | 1 |
| ஆரம்ப நிலைமாற்றம் | 95℃ | 5 வி | 1 |
| டினாடரேஷன் | 95℃ | 3 வி | 43 |
| அனீலிங்/நீட்டிப்பு | 60℃ | 10 வி |
குறிப்புகள்:
அ.தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் வெப்பநிலை 50℃ முதல் 60℃ வரை உள்ளது, வெப்பநிலையை அதிகரிப்பது சிக்கலான கட்டமைப்புகள் மற்றும் உயர் CG உள்ளடக்க டெம்ப்ளேட்களை பெருக்க உதவுகிறது;
பி.ப்ரைமரின் டிஎம் மதிப்பின் அடிப்படையில் உகந்த அனீலிங் வெப்பநிலை சரிசெய்யப்பட வேண்டும், மேலும் ரியல் டைம் பிசிஆர் கருவியின் அடிப்படையில் ஃப்ளோரசன் சிக்னல் சேகரிப்புக்கான குறுகிய நேரத்தைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
குறிப்புகள்
உங்கள் உடல்நலம் மற்றும் பாதுகாப்பை உறுதிப்படுத்த, தேவையான PPE, அத்தகைய ஆய்வக கோட் மற்றும் கையுறைகளை அணியுங்கள்!
