ரோபஸ்டார்ட் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்

Robustart Taq DNA பாலிமரேஸ் ஒரு சூடான தொடக்க DNA பாலிமரேஸ் ஆகும்.இந்த தயாரிப்பு பிசிஆர் சிஸ்டம் தயாரித்தல் மற்றும் பெருக்கத்தின் செயல்பாட்டில் ப்ரைமர்கள் அல்லது ப்ரைமர் ஒருங்கிணைப்பு ஆகியவற்றால் ஏற்படும் குறிப்பிட்ட அல்லாத எதிர்வினைகளை மட்டும் சிறப்பாக தடுக்க முடியாது.எனவே, இது சிறந்த தனித்தன்மையைக் கொண்டுள்ளது மற்றும் குறைந்த செறிவு வார்ப்புருக்களின் பெருக்கத்திற்கு மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும், மேலும் இது மல்டிபிளெக்ஸ் செய்யப்பட்ட PCR பெருக்க எதிர்வினைக்கு ஏற்றது.மேலும், இந்த தயாரிப்பு மிகவும் நல்ல பொருந்தக்கூடிய தன்மையைக் கொண்டுள்ளது, மேலும் பல்வேறு வகையான PCR எதிர்வினைகளில் நிலையான பெருக்க முடிவுகளைப் பெறலாம்.

கூறுகள்

1.5 U/μL ரோபஸ்டார்ட் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்

2.10 × PCR இடையக II (Mg²+ இலவசம்) (விரும்பினால்)

3.25 மிமீ MgCl₂(விரும்பினால்)

* 10 × PCR இடையக II (Mg²+ இலவசம்) dNTP மற்றும் Mg²+ ஐக் கொண்டிருக்கவில்லை, தயவுசெய்து dNTPs மற்றும் MgCl ஐச் சேர்க்கவும்₂எதிர்வினை அமைப்பைத் தயாரிக்கும் போது.

பரிந்துரைக்கப்பட்ட பயன்பாடுகள்

1.வேகமான பெருக்கம்.

2.பல பெருக்கம்.

3.இரத்தம், ஸ்வாப்கள் மற்றும் பிற மாதிரிகளின் நேரடி பெருக்கம்.

4.சுவாச நோய்கள் கண்டறிதல்.

சேமிப்பு நிலை

நீண்ட கால சேமிப்பிற்காக -20°C, பயன்படுத்துவதற்கு முன் நன்கு கலக்கப்பட வேண்டும், அடிக்கடி உறைதல்-கரைப்பதை தவிர்க்கவும்.

*குளிரூட்டலுக்குப் பிறகு மழைப்பொழிவு ஏற்பட்டால், அது இயல்பானது;கலந்து பயன்படுத்துவதற்கு முன் அறை வெப்பநிலையில் சமநிலைப்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

அலகு வரையறை

செயல்படுத்தப்பட்ட சால்மன் விந்தணு டிஎன்ஏவை டெம்ப்ளேட்/ப்ரைமராகப் பயன்படுத்தி 30 நிமிடங்களுக்கு 74 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 10 என்மோல் டியோக்சிரைபோநியூக்ளியோடைடை அமிலத்தில் கரையாத பொருளில் இணைக்கும் நொதியின் அளவு ஒரு செயலில் உள்ள அலகு (U) என வரையறுக்கப்படுகிறது.

தர கட்டுப்பாடு

1.SDS-PAGE எலக்ட்ரோஃபோரெடிக் தூய்மை 98%க்கு மேல்.

2.பெருக்க உணர்திறன், தொகுதி முதல் தொகுதி கட்டுப்பாடு, நிலைத்தன்மை.

3.வெளிப்புற நியூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லை, வெளிப்புற எண்டோநியூக்லீஸ் அல்லது எக்ஸோநியூக்லீஸ் மாசுபாடு இல்லை

வழிமுறைகள்

எதிர்வினை அமைப்பு

குறிப்புகள்:

1) a.இடையகத்தில் dNTP மற்றும் Mg²+ இல்லை, தயவுசெய்து dNTPs மற்றும் MgCl ஐச் சேர்க்கவும்₂எதிர்வினை அமைப்பைத் தயாரிக்கும் போது.

2) பி.qPCR/qRT-PCRக்கு பயன்படுத்தினால், ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வுகள் எதிர்வினை அமைப்பில் சேர்க்கப்பட வேண்டும்.வழக்கமாக, 0.2 μM இன் இறுதி ப்ரைமர் செறிவு நல்ல பலனைத் தரும்;எதிர்வினை செயல்திறன் மோசமாக இருந்தால், ப்ரைமர் செறிவு 0.2-1 μM வரம்பில் சரிசெய்யப்படலாம்.ஆய்வு செறிவு பொதுவாக 0.1-0.3 μM வரம்பில் உகந்ததாக இருக்கும்.ப்ரைமர் மற்றும் ஆய்வு ஆகியவற்றின் சிறந்த கலவையைக் கண்டறிய செறிவு சாய்வு சோதனைகள் செய்யப்படலாம்.

வெப்ப சைக்கிள் ஓட்டுதல் நெறிமுறை

குறிப்புகள்

1.வேகமான DNA பாலிமரேஸின் பெருக்க விகிதம் 1 kb/10 s க்கும் குறைவாக இருக்கக்கூடாது.வெவ்வேறு PCR கருவிகளின் வெப்பநிலை உயர்வு மற்றும் வீழ்ச்சி விகிதம், வெப்பநிலை கட்டுப்பாட்டு முறை மற்றும் வெப்ப கடத்துத்திறன் ஆகியவை பெரிதும் மாறுபடும், எனவே குறிப்பிட்ட வேகமான PCR கருவிக்கு உகந்த எதிர்வினை நிலைமைகளை மேம்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

2.இந்த அமைப்பு, அதிக விவரக்குறிப்பு மற்றும் உணர்திறன் ஆகியவற்றுடன் மிகவும் ஏற்றதாக உள்ளது.

3.அதிக உணர்திறன் PCR கண்டறிதல் எதிர்வினைகளாகப் பயன்படுத்துவதற்கு ஏற்றது, மேலும் மல்டிபிளக்ஸ் PCR பெருக்க எதிர்வினைகளில் பயன்படுத்தலாம்.

4.5′→3′ பாலிமரேஸ் செயல்பாடு, 5′→3′ எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாடு;இல்லை 3′→5′ exonuclease செயல்பாடு;சரிபார்த்தல் செயல்பாடு இல்லை.

5.PCR மற்றும் RT-PCR இன் தரமான மற்றும் அளவு சோதனைக்கு ஏற்றது.

6.PCR தயாரிப்பின் 3′ முடிவானது A ஆகும், இது நேரடியாக T வெக்டரில் குளோன் செய்யப்படலாம்.

7.குறைந்த அனீலிங் வெப்பநிலை கொண்ட ப்ரைமர்களுக்கு அல்லது 200 பிபிக்கு மேல் நீளமான துண்டுகளை பெருக்குவதற்கு மூன்று-படி முறை பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.