DNase I (Rnase இலவசம்)(5u/ul)
பூனை எண்: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) என்பது ஒரு எண்டோடாக்சிரைபோநியூக்லீஸ் ஆகும், இது ஒற்றை அல்லது இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவை ஜீரணிக்கக்கூடியது.இது 5'-டெர்மினலில் பாஸ்பேட் குழுக்களையும் 3'-முனையத்தில் ஹைட்ராக்சைலையும் கொண்டு மோனோடாக்சிநியூக்ளியோடைடுகள் அல்லது ஒற்றை அல்லது இரட்டை இழைகள் கொண்ட ஒலிகோடாக்சிநியூக்ளியோடைடுகளை உருவாக்க பாஸ்போடைஸ்டர் பிணைப்புகளை அங்கீகரித்து பிளவுபடுத்துகிறது.DNase I இன் செயல்பாடு Ca ஐ சார்ந்துள்ளது2+மற்றும் Mn போன்ற இருவேல உலோக அயனிகளால் செயல்படுத்தப்படலாம்2+மற்றும் Zn2+.5 மிமீ Ca2+நீர்ப்பகுப்பிலிருந்து நொதியைப் பாதுகாக்கிறது.எம்ஜி முன்னிலையில்2+, என்சைம் டிஎன்ஏவின் எந்த இழையிலும் எந்த தளத்தையும் தோராயமாக அடையாளம் கண்டு பிளவுபடுத்த முடியும்.Mn முன்னிலையில்2+, டிஎன்ஏவின் இரட்டை இழைகள் ஒரே நேரத்தில் அடையாளம் காணப்பட்டு, கிட்டத்தட்ட அதே இடத்தில் பிளவுபட்டு 1-2 நியூக்ளியோடைடுகள் நீண்டுகொண்டிருக்கும் பிளாட் எண்ட் டிஎன்ஏ துண்டுகள் அல்லது ஒட்டும் முனை டிஎன்ஏ துண்டுகளை உருவாக்குகின்றன.
கூறுகள்
| பெயர் | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-இலவசம் | 20μL | 200μL | 1மிலி | 10 மி.லி |
| 10×DNase I தாங்கல் | 1மிலி | 1மிலி | 5 × 1மிலி | 5 × 10 மிலி |
களஞ்சிய நிலைமை
சேமிப்பிற்காக -25℃~-15℃;ஐஸ் கட்டிகளின் கீழ் போக்குவரத்து.
வழிமுறைகள்
1. கீழே பட்டியலிடப்பட்டுள்ள விகிதங்களின்படி RNase-இலவச குழாயில் எதிர்வினைத் தீர்வைத் தயாரிக்கவும்:
| கூறு | தொகுதி |
| ஆர்.என்.ஏ | X µg |
| 10 × DNase I தாங்கல் | 1μL |
| DNase I, RNase-free(5U/μL) | ஒரு µg RNA①க்கு 1 U |
| ddH2O | 10μL வரை |
குறிப்பு: ①ஆர்என்ஏவின் அளவின் அடிப்படையில் சேர்க்கப்பட வேண்டிய DNase I இன் அளவைக் கணக்கிடவும்.
2. 15 நிமிடங்களுக்கு 37 ℃;
3. 2.5mM~5mM இன் இறுதி செறிவுக்கு 0.5M EDTA ஐச் சேர்த்து, எதிர்வினையை நிறுத்த 65℃ 10 நிமிடங்களுக்கு சூடாக்கவும்.ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் போன்ற அடுத்த எதிர்வினைக்கு மாதிரி நேரடியாகப் பயன்படுத்தப்படலாம்பரிசோதனை.
அலகு வரையறை
ஒரு அலகு நொதியின் அளவு என வரையறுக்கப்படுகிறது, இது 1µg pBR322 ஐ முழுமையாக சிதைக்கும்37℃ இல் 10 நிமிடங்களில் டிஎன்ஏ.
தர கட்டுப்பாடு
RNase:5U DNase I உடன் 1.6µg MS2 RNA 37℃ இல் 4 மணிநேரத்திற்கு எந்தச் சிதைவையும் அளிக்காதுஅகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் தீர்மானிக்கப்படுகிறது.
குறிப்புகள்
1. 0.5மெட்டாவை நீங்களே தயார் செய்யுங்கள்.
2. ஒரு µg RNA க்கு 1U DNase I ஐப் பயன்படுத்தவும்.இருப்பினும், RNA 1µg க்கும் குறைவாக இருந்தால், தயவுசெய்து 1U DNase I ஐப் பயன்படுத்தவும்.
3. செயல்பாட்டின் போது என்சைமை ஐஸ் மீது வைக்கவும்.
