சூப்பர்ஸ்டார்ட் qPCR Premix plus-UNG
பூனை எண்: HCB5071E
சூப்பர்ஸ்டார்ட் qPCR ப்ரீமிக்ஸ் ப்ளஸ்-யுஎன்ஜி என்பது நிகழ்நேர PCR தரமான மற்றும் அளவு எதிர்வினைகளுக்காக வடிவமைக்கப்பட்ட ஒரு சிறப்பு மறுஉருவாக்கமாகும், இது ஆய்வு-அடிப்படையிலான கண்டறிதலைப் பயன்படுத்தி குறிப்பாக லியோபிலைசேஷன் செயல்முறைகளுக்காக உருவாக்கப்பட்டது.இது ஒரு புதிய ஹாட்-ஸ்டார்ட் என்சைம் ஹாட்ஸ்டார்ட் டாக் பிளஸ் (டிஜி) ஐக் கொண்டுள்ளது, இது அதன் டாக் என்சைம் செயல்பாட்டை அறை வெப்பநிலையில் அடைத்து, குறைந்த வெப்பநிலை நிலைகளின் கீழ் ப்ரைமர் அல்லாத அனீலிங் அல்லது ப்ரைமர் டைமர் உருவாவதால் ஏற்படும் குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கத்தைத் திறம்பட தடுக்கிறது, இதனால் மேம்படுகிறது. பெருக்க எதிர்வினையின் தனித்தன்மை.qPCR எதிர்வினைகளின் செயல்திறன் மற்றும் உணர்திறனை பெரிதும் மேம்படுத்தி, விரைவான வெப்ப-தொடக்கத்தை அடைய, இந்த மறுஉருவாக்கமானது உகந்த qPCR குறிப்பிட்ட தாங்கல் மற்றும் UNG/dUTP மாசு எதிர்ப்பு அமைப்பைப் பயன்படுத்துகிறது.இது பரந்த அளவிலான அளவீட்டுப் பகுதிகளில் நல்ல நிலையான வளைவுகளைப் பெறலாம் மற்றும் துல்லியமாக அளவீட்டைச் செய்யலாம், மீதமுள்ள PCR தயாரிப்புகள் அல்லது ஏரோசல் மாசுபாட்டால் ஏற்படும் தவறான நேர்மறை பெருக்கத்தைத் திறம்பட தடுக்கிறது.அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ், எப்பென்டோர்ஃப், பயோ-ராட் மற்றும் ரோச் போன்ற உற்பத்தியாளர்களின் பெரும்பாலான ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR கருவிகளுடன் இந்த மறுஉருவாக்கம் இணக்கமானது, மேலும் லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட வடிவத்தில் நல்ல நிலைத்தன்மையை வெளிப்படுத்துகிறது.
எதிர்வினை கலவை
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+இலவசம்) (டிஜி)
2. 250 மிமீ MgCl2
3. 4× லைப்ரோடெக்டண்ட் (விரும்பினால்)
களஞ்சிய நிலைமை
-20℃ இல் நீண்ட கால சேமிப்பு;4℃ வெப்பநிலையில் 3 மாதங்கள் வரை சேமிக்க முடியும்.பயன்படுத்துவதற்கு முன் நன்கு கலக்கவும்மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் உருகுவதை தவிர்க்கவும்.
சைக்கிள் ஓட்டுதல் நெறிமுறை
| செயல்முறை | வெப்பநிலை | நேரம் | மிதிவண்டி |
| செரிமானம் | 50℃ | 2 நிமிடம் | 1 |
| பாலிமரேஸ் செயல்படுத்தல் | 95℃ | 1~5 நிமிடம் | 1 |
| டெனாச்சர் | 95℃ | 10~20 வி | 40-50 |
| அனீலிங் மற்றும் நீட்டிப்பு | 56~64℃ | 20~60 வி | 40-50 |
qPCR திரவ எதிர்வினை Syதண்டு தயாரிப்பு
|
கலவை |
25µL தொகுதி |
50µL தொகுதி |
இறுதி செறிவு |
| 5×HotstartPremix பிளஸ்-UNG(எம்ஜி2+இலவசம்) (டிஜி) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250எம்எம் எம்ஜிசிஎல்2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 மி.மீ |
| 4× லைப்ரோடெக்டண்ட்1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×பிரைமர்-புரோப் மிக்ஸ்2 | 1µL | 2µL | 1× |
| டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏ3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25µL வரை | 50µL வரை | —— |
1. ப்ரைமர்களுக்கான இறுதி செறிவு 0.2μM பொதுவாக நல்ல பலனைத் தரும்;எதிர்வினை செயல்திறன் மோசமாக இருக்கும் போது, தேவைக்கேற்ப 0.2-1μM வரம்பிற்குள் ப்ரைமர் செறிவை சரிசெய்யவும்.உகந்த சேர்க்கைகளைக் கண்டறிய சாய்வு சோதனைகள் மூலம் ஆய்வு செறிவு பொதுவாக 0.1-0.3μM வரம்பிற்குள் உகந்ததாக இருக்கும்.
2. வெவ்வேறு வகையான வார்ப்புருக்களில் உள்ள இலக்கு மரபணுக்களின் நகல் எண்ணிக்கை மாறுபடும்;தேவைப்பட்டால், உகந்த வார்ப்புரு கூட்டல் அளவை தீர்மானிக்க சாய்வு நீர்த்தலைச் செய்யலாம்.
3. இந்த அமைப்பு lyophilized முடியும்;வாடிக்கையாளர்கள் உறைதல்-உலர்த்துதல் தேவைகள் இல்லாமல் இந்த அமைப்பைப் பயன்படுத்தும் போது, 4×லைப்ரோடெக்டண்ட் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட முறையில் சேர்க்கப்படலாம்; உறைந்த-உலர்ந்த பொருட்கள் தேவைப்பட்டால், திரவ ரீஜெண்டுகள் நிலை தயாரிப்பு செயல்திறன் சரிபார்ப்பின் போது, லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட கணினி கூறுகளுடன் நிலைத்தன்மையை உறுதிப்படுத்த 4×லைப்ரோடெக்டண்ட் சேர்க்க வேண்டும். மற்றும் விளைவுகள்.
அமைப்பு பயன்படுத்தும் போதுd முடக்கம்-உலர்த்துதல், தயார் அமைப்பு as பின்வருபவை:
| கலவை | 25µL எதிர்வினை அமைப்பு |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+இலவசம்) (டிஜி) | 5µL |
| 250எம்எம் எம்ஜிசிஎல்2 | 0.45µL |
| 4× லைப்ரோடெக்டண்ட் | 6.25µL |
| 25×ப்ரைமர்-புரோப் மிக்ஸ் | 1µL |
| ddH2O | 18~20µL வரை |
* உறைதல் உலர்த்துதலுக்கான பிற அமைப்புகள் தேவைப்பட்டால், தனித்தனியாகக் கலந்தாலோசிக்கவும்.
லியோபிலைசேஷன் செயல்முறைss
| செயல்முறை | வெப்பநிலை | நேரம் | நிலை | அழுத்தம் |
| முன் உறைதல் | 4℃ | 30 நிமிடம் | பிடி |
1 ஏடிஎம் |
| -50℃ | 60 நிமிடம் | குளிர்ச்சி | ||
| -50℃ | 180 நிமிடம் | பிடி | ||
| முதன்மை உலர்த்துதல் | -30℃ | 60 நிமிடம் | வெப்பமூட்டும் |
அல்டிமேட் வெற்றிடம் |
| -30℃ | 70 நிமிடம் | பிடி | ||
| இரண்டாம் நிலை உலர்த்துதல் | 25℃ | 60 நிமிடம் | வெப்பமூட்டும் |
அல்டிமேட் வெற்றிடம் |
| 25℃ | 300 நிமிடம் | பிடி |
2. மேலே உள்ள lyophilization செயல்முறை குறிப்புக்கு மட்டுமே.வெவ்வேறு தயாரிப்பு வகைகள் மற்றும் வெவ்வேறு முடக்கம்-உலர்த்திகள் வெவ்வேறு அளவுருக்களைக் கொண்டிருக்கின்றன, எனவே உண்மையான படி சரிசெய்தல் செய்யலாம்பயன்பாட்டின் போது நிலைமைகள்.
3. வெவ்வேறு லியோபிலைசேஷன் செயல்முறைகள் வெவ்வேறு தொகுதி அளவுகளுக்கு ஏற்றதாக இருக்கலாம்தயாரிப்புகள், எனவே பெரிய அளவிலான உற்பத்திக்கு பயன்படுத்தும் போது போதுமான சோதனை சரிபார்ப்பு செய்யப்பட வேண்டும்.
லியோபிலைஸைப் பயன்படுத்துவதற்கான வழிமுறைகள்d தூள்
1. lyophilized தூள் சுருக்கமாக மையவிலக்கு;
2. நியூக்ளிக் அமில வார்ப்புருவை லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட தூளில் சேர்த்து 25µL வரை தண்ணீரைச் சேர்க்கவும்;
3. மையவிலக்கு மூலம் நன்கு கலந்து இயந்திரத்தில் இயக்கவும்.
தர கட்டுப்பாடு:
1. செயல்பாட்டு சோதனை: உணர்திறன், தனித்தன்மை, qPCR இன் மறுஉருவாக்கம்.
2. எக்ஸோஜனஸ் நியூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லை, வெளிப்புற எண்டோ/எக்ஸோநியூக்லீஸ் மாசுபாடு இல்லை.
தொழில்நுட்ப தகவல்:
1. சூப்பர்ஸ்டார்ட் qPCR Premix plus-UNG ஆனது ஒரு புதிய ஹாட்-ஸ்டார்ட் என்சைமைப் பயன்படுத்துகிறது, இது 1~5 நிமிடங்களுக்குள் வேகமான சூடான-தொடக்கத்தை செயல்படுத்துகிறது;சிறப்பு இடையக உருவாக்கம் மூலம் இது மல்டிபிளக்ஸ் ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR எதிர்வினைகளுக்கு ஏற்றது.
2. இது ஃப்ளோரசன்ஸின் அளவு PCR வரம்பு கண்டறிதலின் உணர்திறனை கணிசமாக மேம்படுத்துகிறது, பெருக்க வளைவுகளை இயல்பாக்குகிறது, ஒளிரும் மதிப்பு குறைந்த செறிவு வார்ப்புருக்களில் வெளிப்படையான முன்னேற்றத்தைப் பெறுகிறது, அதிக உணர்திறன் ஃப்ளோரசன்ஸின் அளவு PCR கண்டறிதல் ரியாஜெண்டுகளுக்கு ஏற்றது.
3. குறைந்த அனீலிங் வெப்பநிலை அல்லது 200bp துண்டுகளை விட நீளமான ப்ரைமர்களுக்கு, 3-படி முறை பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
4. டியூடிபியின் பயன்பாட்டுத் திறன் மற்றும் யுஎன்ஜி நொதிக்கான உணர்திறன் ஆகியவை வெவ்வேறு இலக்கு மரபணுக்களுக்கு வேறுபடுகின்றன, எனவே யுஎன்ஜி அமைப்பைப் பயன்படுத்துவது கண்டறிதல் உணர்திறன் குறைவதற்கு வழிவகுத்தால், எதிர்வினை அமைப்பு சரிசெய்யப்பட்டு மேம்படுத்தப்பட வேண்டும்.தொழில்நுட்ப ஆதரவு தேவைப்பட்டால், எங்கள் நிறுவனத்தைத் தொடர்பு கொள்ளவும்.
5. பெருக்கத்திற்கு முன்னும் பின்னும் அர்ப்பணிக்கப்பட்ட பகுதிகள் மற்றும் குழாய்களைப் பயன்படுத்தவும், செயல்பாட்டின் போது கையுறைகளை அணிந்து அவற்றை அடிக்கடி மாற்றவும்;PCR தயாரிப்புகளால் மாதிரிகள் மாசுபடுவதைக் குறைக்க PCR முடிந்த பிறகு எதிர்வினைக் குழாயைத் திறக்க வேண்டாம்.
