புரோட்டீனேஸ் கே என்ஜிஎஸ் (தூள்)
பூனை எண்: HC4507A
NGS Protease K என்பது உயர் நொதி செயல்பாடு மற்றும் பரந்த அடி மூலக்கூறு விவரக்குறிப்பு கொண்ட ஒரு நிலையான செரின் புரோட்டீஸ் ஆகும். இந்த நொதி ஹைட்ரோபோபிக் அமினோ அமிலங்கள், சல்பர் கொண்ட அமினோ அமிலங்கள் மற்றும் நறுமண அமினோ அமிலங்களின் சி-டெர்மினலுக்கு அருகில் உள்ள எஸ்டர் பிணைப்புகள் மற்றும் பெப்டைட் பிணைப்புகளை முன்னுரிமையாக சிதைக்கிறது.எனவே, புரதங்களை குறுகிய பெப்டைட்களாக சிதைக்க இது பெரும்பாலும் பயன்படுத்தப்படுகிறது.NGS Protease K என்பது Asp உடன் கூடிய ஒரு பொதுவான செரின் புரோட்டீஸ் ஆகும்39-அவருடைய69-சேர்224வினையூக்கி முக்கோணம் இது செரின் புரோட்டீஸுக்கு தனித்துவமானது, மற்றும் வினையூக்கி மையம் கயிறு Ca ஆல் சூழப்பட்டுள்ளது2+நிலைப்படுத்தலுக்கான பிணைப்பு தளங்கள், பரந்த அளவிலான நிலைமைகளின் கீழ் அதிக நொதி செயல்பாட்டை பராமரித்தல்.
விவரக்குறிப்பு
| தோற்றம் | வெள்ளை நிறத்தில் இருந்து வெள்ளை நிறத்தில் உள்ள உருவமற்ற தூள், lyophilized |
| குறிப்பிட்ட செயல்பாடு | ≥40U/mg திடப்பொருள் |
| DNase | எதுவும் கண்டறியப்படவில்லை |
| RNase | எதுவும் கண்டறியப்படவில்லை |
| பயோபர்டன் | ≤50CFU/g திடம் |
| நியூக்ளிக் அமில எச்சம் | <5pg/mg திட |
பண்புகள்
| ஆதாரம் | டிரிடிராச்சியம் ஆல்பம் |
| EC எண் | 3.4.21.64(டிரிடிராச்சியம் ஆல்பத்திலிருந்து மறுசீரமைப்பு) |
| மூலக்கூறு எடை | 29kDa (SDS-பக்கம்) |
| ஐசோ எலக்ட்ரிக் புள்ளி | 7.81 படம்.1 |
| உகந்த pH | 7.0-12.0 (அனைத்தும் உயர் செயல்பாட்டைச் செய்கின்றன) படம்.2 |
| உகந்த வெப்பநிலை | 65℃ படம்.3 |
| pH நிலைத்தன்மை | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) படம்.4 |
| வெப்ப நிலைத்தன்மை | 50℃ கீழே (pH 8.0, 30min) படம்.5 |
| சேமிப்பக நிலைத்தன்மை | 12 மாதங்களுக்கு 25℃ இல் சேமிக்கப்படும் படம்.6 |
| ஆக்டிவேட்டர்கள் | எஸ்டிஎஸ், யூரியா |
| தடுப்பான்கள் | டைசோபிரைல் ஃப்ளோரோபாஸ்பேட்;பென்சில்சல்போனைல் புளோரைடு |
களஞ்சிய நிலைமை
லையோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட பொடியை -25~-15 ℃ இல் நீண்ட நேரம் ஒளியிலிருந்து விலக்கி வைக்கவும்;கரைந்த பிறகு, ஒளியில் இருந்து 2-8℃ தொலைவில் குறுகிய கால சேமிப்பிற்காக அலிகோட் பொருத்தமான அளவு அல்லது ஒளியிலிருந்து -25~-15 ℃ தொலைவில் நீண்ட கால சேமிப்பு.
தற்காப்பு நடவடிக்கைகள்
பயன்படுத்தும் போது அல்லது எடைபோடும் போது பாதுகாப்பு கையுறைகள் மற்றும் கண்ணாடிகளை அணியவும், பயன்படுத்திய பிறகு நன்கு காற்றோட்டமாக வைக்கவும்.இந்த தயாரிப்பு தோல் ஒவ்வாமை மற்றும் கடுமையான கண் எரிச்சலை ஏற்படுத்தும்.உள்ளிழுத்தால், அது ஒவ்வாமை அல்லது ஆஸ்துமா அறிகுறிகள் அல்லது மூச்சுத்திணறல் ஏற்படலாம்.சுவாச எரிச்சல் ஏற்படலாம்.
அலகு வரையறை
NGS Protease K இன் ஒரு யூனிட், நிலையான நிர்ணய நிலைமைகளின் கீழ் கேசீனை 1 μmol L-டைரோசினாக ஹைட்ரோலைஸ் செய்ய தேவையான நொதியின் அளவு என வரையறுக்கப்படுகிறது.
எதிர்வினைகள் தயாரிப்பு
| வினைப்பொருள் | உற்பத்தியாளர் | அட்டவணை |
| கேசீன் தொழில்நுட்பம்பசுவின் பாலில் இருந்து | சிக்மா ஆல்ட்ரிச் | C7078 |
| NaOH | சினோபார்ம் கெமிக்கல்ரீஜென்ட் கோ., லிமிடெட். | 10019762 |
| NaH2PO4·2எச்2O | சினோபார்ம் கெமிக்கல்ரீஜென்ட் கோ., லிமிடெட். | 20040718 |
| Na2HPO4 | சினோபார்ம் கெமிக்கல்ரீஜென்ட் கோ., லிமிடெட். | 20040618 |
| ட்ரைக்ளோரோஅசிட்டிக் அமிலம் | சினோபார்ம் கெமிக்கல்ரீஜென்ட் கோ., லிமிடெட். | 80132618 |
| சோடியம் அசிடேட் | சினோபார்ம் கெமிக்கல்ரீஜென்ட் கோ., லிமிடெட். | 10018818 |
| அசிட்டிக் அமிலம் | சினோபார்ம் கெமிக்கல்ரீஜென்ட் கோ., லிமிடெட். | 10000218 |
| HCl | சினோபார்ம் கெமிக்கல்ரீஜென்ட் கோ., லிமிடெட். | 10011018 |
| சோடியம் கார்பனேட் | சினோபார்ம் கெமிக்கல்ரீஜென்ட் கோ., லிமிடெட். | 10019260 |
| ஃபோலின்-பீனால் | சாங்கோன் பயோடெக் (ஷாங்காய்)கோ., லிமிடெட் | A500467-0100 |
| எல்-டைரோசின் | சிக்மா | 93829 |
ரீஜென்ட் I:
அடி மூலக்கூறு: பசுவின் பால் கரைசலில் இருந்து 1% கேசீன்: 1 கிராம் மாட்டுப் பால் கேசீனை 50 மில்லி 0.1M சோடியம் பாஸ்பேட் கரைசலில் கரைக்கவும், pH 8.0, 65-70 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 15 நிமிடங்கள் தண்ணீர் குளியலில் சூடாக்கவும், கிளறி கரைக்கவும், தண்ணீரில் ஆறவைக்கவும். சோடியம் ஹைட்ராக்சைடு pH 8.0க்கு, மற்றும் 100ml வரை நீர்த்தவும்.
ரீஜென்ட் II:
TCA கரைசல்: 0.1M ட்ரைக்ளோரோஅசிட்டிக் அமிலம், 0.2M சோடியம் அசிடேட் மற்றும் 0.3M அசிட்டிக் அமிலம் (எடை 1.64g ட்ரைக்ளோரோஅசெட்டிக் அமிலம் + 1.64g சோடியம் அசிடேட் + 1.724mL அசிட்டிக் அமிலம் அடுத்தடுத்து, 50mL அசிட்டிக் அமிலம், H.Cl 0 டீயோனைஸ்டு நீரில், 50mL டீயோனைஸ்டு நீரில் சேர்க்கவும் 100மிலி).
ரீஜென்ட் III:
0.4 மீ சோடியம் கார்பனேட் கரைசல் (4.24 கிராம் அன்ஹைட்ரஸ் சோடியம் கார்பனேட் மற்றும் 100 மிலி தண்ணீரில் கரைக்கவும்)
ரீஜென்ட் IV:
ஃபோலின் ஃபீனால் மறுஉருவாக்கம்: டீயோனைஸ் செய்யப்பட்ட தண்ணீரில் 5 முறை நீர்த்தவும்.
ரீஜென்ட் வி:
என்சைம் நீர்த்த: 0.1 M சோடியம் பாஸ்பேட் கரைசல், pH 8.0.
ரீஜென்ட் VI:
எல்-டைரோசின் நிலையான தீர்வு:0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-டைரோசின் 0.2M HCl உடன் கரைக்கப்பட்டது.
செயல்முறை
1. UV-Vis ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரை இயக்கி, ஃபோட்டோமெட்ரிக் அளவீட்டைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
2. அலைநீளத்தை 660nm ஆக அமைக்கவும்.
3. தண்ணீர் குளியலை இயக்கவும், வெப்பநிலையை 37℃ ஆக அமைக்கவும், 3-5 நிமிடங்களுக்கு வெப்பநிலை மாறாமல் இருப்பதை உறுதி செய்யவும்.
4. 0.5mL அடி மூலக்கூறை 2mL மையவிலக்குக் குழாயில் 37℃ தண்ணீர் குளியலில் 10நிமிடங்களுக்கு முன்கூட்டியே சூடாக்கவும்.
5. 0.5மிலி நீர்த்த நொதிக் கரைசலை 10 நிமிடங்களுக்கு முன் சூடேற்றப்பட்ட மையவிலக்குக் குழாயில் பிரித்தெடுக்கவும்.என்சைம் நீர்த்தத்தை வெற்று குழுவாக அமைக்கவும்.
6. எதிர்வினைக்குப் பிறகு உடனடியாக 1.0 மிலி டிசிஏ ரீஜென்டைச் சேர்க்கவும்.நன்றாக கலந்து 30 நிமிடம் தண்ணீர் குளியலில் அடைகாக்கவும்.
7. மையவிலக்கு எதிர்வினை தீர்வு.
8. குறிப்பிடப்பட்ட வரிசையில் பின்வரும் கூறுகளைச் சேர்க்கவும்.
| வினைப்பொருள் | தொகுதி |
| சூப்பர்நேட்டண்ட் | 0.5 மி.லி |
| 0.4M சோடியம் கார்பனேட் | 2.5 மி.லி |
| ஃபோலின் பீனால் மறுஉருவாக்கம் | 0.5 மி.லி |
9. 30 நிமிடங்களுக்கு 37℃ தண்ணீர் குளியலில் அடைகாக்கும் முன் நன்கு கலக்கவும்.
10. OD660OD என தீர்மானிக்கப்பட்டது1;வெற்று கட்டுப்பாட்டு குழு: OD ஐ தீர்மானிக்க என்சைம் கரைசலுக்கு பதிலாக என்சைம் நீர்த்தம் பயன்படுத்தப்படுகிறது660OD ஆக2, ΔOD=OD1-ஓ.டி2.
11. L-டைரோசின் நிலையான வளைவு: 0.5mL வெவ்வேறு செறிவு L-டைரோசின் கரைசல், 2.5mL 0.4M சோடியம் கார்பனேட், 5mL மையவிலக்குக் குழாயில் 0.5mL ஃபோலின் ஃபீனால் மறுஉருவாக்கம், 30 நிமிடங்களுக்கு 37℃ இல் அடைகாத்து, OD க்கு கண்டறிதல்660எல்-டைரோசினின் வெவ்வேறு செறிவுகளுக்கு, பின்னர் நிலையான வளைவு Y=kX+b பெறப்பட்டது, இங்கு Y என்பது L-டைரோசின் செறிவு, X என்பது OD600.
கணக்கீடு
2: எதிர்வினை கரைசலின் மொத்த அளவு (mL)
0.5: என்சைம் கரைசலின் அளவு (mL)
0.5: குரோமோஜெனிக் தீர்மானத்தில் (mL) பயன்படுத்தப்படும் எதிர்வினை திரவ அளவு
10: எதிர்வினை நேரம் (நிமிடம்)
Df: நீர்த்தல் பல
C: என்சைம் செறிவு (mg/mL)
புள்ளிவிவரங்கள்
படம்.1 டிஎன்ஏ எச்சம்
| மாதிரி | ஏவ் C4 | நியூக்ளிக் அமிலம் மீட்பு (pg/mg) | மீட்பு(%) | மொத்த அணுக்கரு அமிலம் ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| STD1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA-இலவச H2O | தீர்மானிக்கப்படவில்லை | — | — | — |
படம்.2 உகந்த pH
படம்.3 உகந்த வெப்பநிலை
படம்.4 pH நிலைத்தன்மை
படம்.5 வெப்ப நிலைத்தன்மை
படம்.6 சேமிப்பு நிலைத்தன்மை 25℃
