வெப்பநிலை உணர்திறன் யுஎன்ஜி
வெப்பநிலை உணர்திறன் யுஎன்ஜி (டிஎஸ்-யுஎன்ஜி) என்பது ஈ.கோலையில் மறுசீரமைப்பு வெளிப்பாடு மூலம் பெறப்பட்டது.இந்த நொதி யுரேசில் கொண்ட ஒற்றை மற்றும் இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவில் இருந்து இலவச யுரேசிலின் வெளியீட்டை ஊக்குவிக்கிறது மற்றும் ஆர்என்ஏவுக்கு எதிராக செயலற்றதாக உள்ளது.E. coli மரபணு தோற்றத்தின் வழக்கமான UNG நொதியுடன் ஒப்பிடும்போது, TS-UNG என்சைம் குறைந்த வெப்பநிலையில் (20℃~37℃) அதிகச் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது மற்றும் வெப்பநிலை உணர்திறன் மற்றும் எளிதில் செயலிழக்கக்கூடியது (50℃), dUTP-கொண்ட பெருக்கத்தின் சிதைவைத் தவிர்க்கிறது. வழக்கமான யுஎன்ஜி என்சைம் செயலிழந்த பிறகு இருக்கும் எஞ்சிய செயல்பாடு மூலம் அறை வெப்பநிலையில் தயாரிப்புகள்.எனவே, TS-UNG நொதி PCR மாசு தடுப்பு எதிர்வினைக்கு ஏற்றது மட்டுமல்ல, RT-PCR பெருக்க திட்டத்துடன் நன்றாக பொருந்துகிறது மற்றும் RT-PCR மாசு தடுப்பு எதிர்வினையில் பயன்படுத்தப்படலாம்.
பரிந்துரைக்கப்பட்ட விண்ணப்பம்
மாசு தடுப்பு பெருக்கம்
சேமிப்பு நிலை
நீண்ட கால சேமிப்பிற்காக -20°C, பயன்படுத்துவதற்கு முன் நன்கு கலக்கப்பட வேண்டும், அடிக்கடி உறைதல்-கரைப்பதை தவிர்க்கவும்.
சேமிப்பு தாங்கல்
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, நிலைப்படுத்தி, 50% கிளிசரால்.
அலகு வரையறை
37 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 1 மணிநேரத்தில் டியூ தளங்களைக் கொண்ட 1µg ஒற்றை இழை டிஎன்ஏவை சிதைக்கத் தேவையான நொதியின் அளவு 1 யூனிட் செயல்பாட்டு (U) ஆகும்.
தர கட்டுப்பாடு
1.SDS-PAGE எலக்ட்ரோஃபோரெடிக் தூய்மை 98%க்கு மேல்
2.சீரழிவு செயல்பாடு, தொகுதி முதல் தொகுதி கட்டுப்பாடு, நிலைத்தன்மை
3.வெளிப்புற நியூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லை, வெளிப்புற எண்டோநியூக்லீஸ் அல்லது எக்ஸோநியூக்லீஸ் மாசுபாடு இல்லை.
வழிமுறைகள்
| கூறுகள் | தொகுதி (μL) | இறுதி செறிவு |
| 10 × PCR இடையக (dNTP இலவசம், Mg²+இலவசம்) | 5 | 1× |
| dUTPகள் (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTPக்கு பதிலாக) | - | 200-600 μM |
| 25 மிமீ MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 மி.மீ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 யூ |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × ப்ரைமர் மிக்ஸ்அ | 2 | 1× |
| டெம்ப்ளேட் | - | 1μg/எதிர்வினை |
| ddH₂O | 50 வரை | - |
குறிப்பு: a: qPCR/qRT-PCRக்கு பயன்படுத்தினால், ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வு எதிர்வினை அமைப்பில் சேர்க்கப்பட வேண்டும்.வழக்கமாக, 0.2 μM இன் இறுதி ப்ரைமர் செறிவு நல்ல பலனைத் தரும்;எதிர்வினை செயல்திறன் மோசமாக இருக்கும்போது, ப்ரைமர் செறிவு 0.2-1 μM வரம்பில் சரிசெய்யப்படலாம்.வழக்கமாக, ஆய்வு செறிவு 0.1-0.3 μM வரம்பில் உகந்ததாக இருக்கும்.ப்ரைமர் மற்றும் ஆய்வு ஆகியவற்றின் சிறந்த கலவையைக் கண்டறிய செறிவு சாய்வு சோதனைகள் செய்யப்படலாம்.
குறிப்புகள்
1.TS-UNG நொதியின் உகந்த எதிர்வினை வெப்பநிலை ஒப்பீட்டளவில் குறைவாக உள்ளது, மேலும் இது 20℃~37℃ வரம்பில் மேம்படுத்தப்படலாம், நொதியின் அளவு மற்றும் எதிர்வினை நேரம் 0.1~0.5 U, 5~ வரம்பில் உகந்ததாக இருக்கும். 10 நிமிடம்;மற்றும் என்சைம் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் செயல்பாட்டில் செயலிழக்க முடியும்.
2.இது மாசுபடுவதைத் தடுக்க PCR மற்றும் RT-PCR க்கு ஏற்றது.
3.அடிக்கடி உறைதல்-கரைப்பதைத் தவிர்க்கவும், பெரிய வெப்பநிலை ஏற்ற இறக்கங்களை வெளிப்படுத்த வேண்டாம்.
4.பெருக்கப்பட வேண்டிய வெவ்வேறு மரபணுக்கள் dUTP இன் வெவ்வேறு பயன்பாட்டுத் திறன் மற்றும் UNG நொதிக்கான உணர்திறன் ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளன, எனவே, UNG அமைப்பின் பயன்பாடு கண்டறிதல் உணர்திறன் குறைவதற்கு வழிவகுத்தால், எதிர்வினை அமைப்பு சரிசெய்யப்பட்டு மேம்படுத்தப்பட வேண்டும், உங்களுக்கு தொழில்நுட்ப ஆதரவு தேவைப்பட்டால், தயவுசெய்து தொடர்பு கொள்ளவும். நம் நிறுவனம்.
