ர்னாஸ் ஏ
Ribonuclease A (RNaseA) என்பது 13.7 kDa மூலக்கூறு எடையுடன் 4 டிஸல்பைட் பிணைப்புகளைக் கொண்ட ஒரு ஒற்றை-இழை பாலிபெப்டைட் ஆகும்.RNase A என்பது ஒரு எண்டோரிபோநியூக்லீஸ் ஆகும், இது குறிப்பாக C மற்றும் U எச்சங்களில் ஒற்றை இழையான RNA ஐ சிதைக்கிறது.குறிப்பாக, பிளவு ஒரு நியூக்ளியோடைட்டின் 5′-ரைபோஸால் உருவாகும் பாஸ்போடைஸ்டர் பிணைப்பை அங்கீகரிக்கிறது மற்றும் அருகிலுள்ள பைரிமிடின் நியூக்ளியோடைட்டின் 3′-ரைபோஸில் உள்ள பாஸ்பேட் குழுவால் 2, 3′-சுழற்சி 3 பாஸ்பேட்டுகள் ஹைட்ரோலைஸ் செய்யப்படுகின்றன. ′நியூக்ளியோசைட் பாஸ்பேட் (எ.கா. pG-pG-pC-pA-pG ஆனது pG-pG-pCp மற்றும் A-PG ஐ உருவாக்க RNase A ஆல் பிளவுபடுத்தப்படுகிறது).RNase A என்பது ஒற்றை இழையான ஆர்என்ஏவை பிளவுபடுத்துவதில் மிகவும் செயலில் உள்ளது.பரிந்துரைக்கப்பட்ட வேலை செறிவு 1-100μG/mL, பல்வேறு எதிர்வினை அமைப்புகளுடன் இணக்கமானது.குறைந்த உப்பு செறிவு (0-100 mM NaCl) RNA-DNA கலப்பினத்தால் உருவாக்கப்பட்ட ஒற்றை-இழையான RNA, இரட்டை இழையான RNA மற்றும் RNA சங்கிலிகளை வெட்டுவதற்கு பயன்படுத்தப்படலாம்.இருப்பினும், அதிக உப்பு செறிவூட்டலில் (≥0.3 M), RNase A ஆனது குறிப்பாக ஒற்றை இழையான RNA ஐ மட்டும் பிளவுபடுத்துகிறது.
பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ அல்லது ஜெனோமிக் டிஎன்ஏ தயாரிப்பின் போது ஆர்என்ஏவை அகற்றுவதற்கு ஆர்நேஸ் ஏ பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. தயாரிப்பு செயல்பாட்டின் போது டிநேஸ் செயலில் உள்ளதா இல்லையா என்பது எதிர்வினையை எளிதில் பாதிக்கலாம்.DNase செயல்பாட்டை செயலிழக்க நீர் குளியல் பாரம்பரிய முறையில் கொதிக்க வைக்கலாம்.இந்த தயாரிப்பு DNase மற்றும் புரோட்டீஸ் ஆகியவற்றைக் கொண்டிருக்கவில்லை, மேலும் பயன்படுத்துவதற்கு முன் வெப்ப சிகிச்சை தேவையில்லை.கூடுதலாக, RNase பாதுகாப்பு பகுப்பாய்வு மற்றும் RNA வரிசை பகுப்பாய்வு போன்ற மூலக்கூறு உயிரியல் சோதனைகளிலும் இந்தத் தயாரிப்பு பயன்படுத்தப்படலாம்.
களஞ்சிய நிலைமை
தயாரிப்பு -25～-15℃ இல் சேமிக்கப்படும், 2 ஆண்டுகளுக்கு செல்லுபடியாகும்.
வழிமுறைகள்
RNase A சேமிப்பக தீர்வு தயாரிப்பதற்கான பொதுவான முறைகளில் இதுவும் ஒன்றாகும்.மூலமாகவும் தயாரிக்கலாம்ஆய்வகம் அல்லது குறிப்பு இலக்கியத்தில் உள்ள பாரம்பரிய முறைகளின்படி பிற முறைகள் (எ.காநேரடியாக 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 அல்லது Tris-NaCl கரைசலில் கரைகிறது)
1. RNase A சேமிப்பு கரைசலை 10 mg/mL தயாரிக்க 10 mM சோடியம் அசிடேட் (pH 5.2) பயன்படுத்தவும்
2. 15 நிமிடங்களுக்கு 100 ℃ வெப்பமாக்கல்
3. அறை வெப்பநிலைக்கு குளிர்ச்சியாக, 1/10 தொகுதி 1 M Tris-HCl (pH 7.4) சேர்க்கவும், அதன் pH ஐ 7.4 (க்குஎடுத்துக்காட்டாக, 500 மில்லி 10g/ml RNase சேமிப்பு தீர்வு 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. உறைந்த சேமிப்பிற்காக -20℃ இல் துணை-தொகுக்கப்பட்டுள்ளது, இது 2 ஆண்டுகள் வரை நிலையாக இருக்கும்.
[குறிப்புகள்]: நடுநிலை நிலையில் RNaseA கரைசலை கொதிக்கும் போது, RNase மழைப்பொழிவு உருவாகும்;குறைந்த pH இல் வேகவைக்கவும், மழைப்பொழிவு இருந்தால், அதைக் காணலாம், இது புரத அசுத்தங்கள் இருப்பதால் ஏற்படலாம்.கொதித்த பிறகு வண்டல் கண்டறியப்பட்டால், அதிவேக மையவிலக்கு (13000rpm) மூலம் அசுத்தங்களை அகற்றலாம், பின்னர் உறைபனி சேமிப்பிற்காக துணை பேக் செய்யலாம்.
பண்டத்தின் விபரங்கள்
| ஒத்த சொற்கள் | ரிபோநியூக்லீஸ் I;கணைய ரிபோநியூக்லீஸ்;ரிபோநியூக்லீஸ் 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;எண்டோரிபோனல்சீஸ் ஐ |
| CAS எண். | 9001-99-4 |
| தோற்றம் | வெள்ளை lyophilized தூள் |
| மூலக்கூறு எடை | ~ 13.7kDa (அமினோ அமில வரிசை) |
| Ph மதிப்பு | 7.6 (செயல்பாடு வரம்பு 6-10) |
| பொருத்தமான வெப்பநிலை | 60℃ (செயல்பாட்டு வரம்பு 15-70℃) |
| செயல்படுத்தும் முகவர் | Na2+.கே+ |
| தடுப்பான் | Rnase தடுப்பான் |
| செயலிழக்க முறை | சூடாக்குவதன் மூலம் செயலிழக்க முடியாது, மையவிலக்கு நெடுவரிசையைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது |
| தோற்றம் | போவின் |
| கரைதிறன் | நீரில் கரையக்கூடியது (10மிகி/மிலி) |
| உலர் மீது இழப்பு | ≤5.0% |
| என்சைம் செயல்பாடு | ≥60 குனிட்ஸ் அலகுகள்/மிகி |
| ஐசோ எலக்ட்ரிக் புள்ளி | 9.6 |
குறிப்புகள்
உங்கள் பாதுகாப்பு மற்றும் ஆரோக்கியத்திற்காக, ஆய்வக கோட்டுகள் மற்றும் செயல்பாட்டிற்கு செலவழிக்கும் கையுறைகளை அணியவும்.
