யுனிவர்சல் SYBR GREEN qPCR பிரீமிக்ஸ் (நீலம்)
பூனை எண்: HCB5041B
யுனிவர்சல் ப்ளூ qPCR மாஸ்டர் மிக்ஸ் (சாய அடிப்படையிலானது) என்பது 2× நிகழ்நேர அளவு PCR பெருக்கத்திற்கான முன்-தீர்வாகும், இது அதிக உணர்திறன் மற்றும் தனித்தன்மையால் வகைப்படுத்தப்படுகிறது, இது நீல நிறத்தில் உள்ளது, மேலும் மாதிரி கூட்டல் டிரேசிங்கின் விளைவையும் கொண்டுள்ளது.முக்கிய கூறு Taq DNA பாலிமரேஸ் மாதிரி தயாரிப்பின் போது ப்ரைமர் அனீலிங் காரணமாக குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கத்தை திறம்பட தடுக்க ஆன்டிபாடி ஹாட் ஸ்டார்ட் பயன்படுத்துகிறது.அதே நேரத்தில், PCR எதிர்வினையின் பெருக்கத் திறனை மேம்படுத்துவதற்கும், வெவ்வேறு GC உள்ளடக்கங்களைக் கொண்ட (30 ~ 70%) மரபணுக்களின் பெருக்கத்தைச் சமன் செய்வதற்கும் சூத்திரம் ஊக்குவிக்கும் காரணிகளைச் சேர்க்கிறது, இதனால் அளவு PCR ஆனது பரந்த அளவில் ஒரு நல்ல நேரியல் உறவைப் பெற முடியும். பிராந்தியம்.இந்தத் தயாரிப்பில் சிறப்பு ROX Passive Reference Dye உள்ளது, இது பெரும்பாலான qPCR கருவிகளுக்குப் பொருந்தும்.வெவ்வேறு கருவிகளில் ROX இன் செறிவை சரிசெய்ய வேண்டிய அவசியமில்லை.பெருக்கத்திற்கான எதிர்வினை அமைப்பைத் தயாரிப்பதற்கு ப்ரைமர்கள் மற்றும் டெம்ப்ளேட்களைச் சேர்ப்பது மட்டுமே அவசியம்.
கூறுகள்
யுனிவர்சல் ப்ளூ qPCR மாஸ்டர் மிக்ஸ்
களஞ்சிய நிலைமை
தயாரிப்பு ஐஸ் கட்டிகளுடன் அனுப்பப்படுகிறது மற்றும் 18 மாதங்களுக்கு -25℃~-15℃ இல் சேமிக்கப்படும்.எதிர்வினை அமைப்பை சேமிக்கும் போது அல்லது தயாரிக்கும் போது வலுவான ஒளி கதிர்வீச்சைத் தவிர்ப்பது அவசியம்.
விவரக்குறிப்பு
| செறிவு | 2× |
| கண்டறியும் முறை | SYBR |
| PCR முறை | qPCR |
| பாலிமரேஸ் | Taq DNA பாலிமரேஸ் |
| மாதிரி வகை | டிஎன்ஏ |
| பயன்பாட்டு உபகரணங்கள் | பெரும்பாலான qPCR கருவிகள் |
| உற்பத்தி பொருள் வகை | நிகழ்நேர ஒளிரும் அளவு PCR க்கான SYBR ப்ரீமிக்ஸ் |
| விண்ணப்பிக்கவும் (விண்ணப்பம்) | மரபணு வெளிப்பாடு |
வழிமுறைகள்
1.எதிர்வினை அமைப்பு
| கூறுகள் | வோலோம்(μL) | வோலோம்(μL) | இறுதி செறிவு |
| யுனிவர்சல் SYBR GREEN qPCR பிரீமிக்ஸ் | 25 | 10 | 1× |
| முன்னோக்கி ப்ரைமர் (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| ரிவர்ஸ் ப்ரைமர் (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| டிஎன்ஏ | X | X | |
| ddH2O | 50 வரை | 20 வரை | - |
[குறிப்பு]: கடுமையான குலுக்கலில் இருந்து அதிகப்படியான குமிழ்களைத் தவிர்க்க, பயன்படுத்துவதற்கு முன் நன்கு கலக்கவும்.
அ) ப்ரைமர் செறிவு: இறுதி ப்ரைமரின் செறிவு 0.2μmol/L ஆகும், மேலும் 0.1 மற்றும் 1.0μmol/L க்கு இடையில் சரிசெய்யலாம்.
b) டெம்ப்ளேட் செறிவு: டெம்ப்ளேட் நீர்த்த சிடிஎன்ஏ ஸ்டாக் தீர்வாக இருந்தால், பயன்படுத்தப்படும் தொகுதி qPCR எதிர்வினையின் மொத்த அளவின் 1/10 ஐ விட அதிகமாக இருக்கக்கூடாது.
c) டெம்ப்ளேட் நீர்த்தல்: சிடிஎன்ஏ ஸ்டாக் கரைசலை 5-10 மடங்கு நீர்த்துப்போகச் செய்ய பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.பெருக்கத்தின் மூலம் பெறப்பட்ட Ct மதிப்பு 20-30 சுழற்சிகளாக இருக்கும் போது சேர்க்கப்படும் வார்ப்புருவின் உகந்த அளவு சிறந்தது.
ஈ) எதிர்வினை அமைப்பு: இலக்கு மரபணு பெருக்கத்தின் செயல்திறன் மற்றும் மீண்டும் மீண்டும் செய்யக்கூடிய தன்மையை உறுதிப்படுத்த 20μL அல்லது 50μL ஐப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
இ) சிஸ்டம் தயாரித்தல்: சூப்பர் க்ளீன் பெஞ்சில் தயார் செய்து, அணுக்கரு எச்சம் இல்லாமல் குறிப்புகள் மற்றும் எதிர்வினை குழாய்களைப் பயன்படுத்தவும்;வடிகட்டி தோட்டாக்களுடன் குறிப்புகளைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.குறுக்கு மாசுபாடு மற்றும் ஏரோசல் மாசுபாட்டைத் தவிர்க்கவும்.
2.எதிர்வினை திட்டம்
நிலையான நிரல்
| சுழற்சி படி | வெப்பநிலை | நேரம் | சுழற்சிகள் |
| ஆரம்ப நிலைமாற்றம் | 95℃ | 2 நிமிடம் | 1 |
| டினாடரேஷன் | 95℃ | 10 நொடி | 40 |
| அனீலிங்/நீட்டிப்பு | 60℃ | 30 நொடி ★ | |
| உருகும் வளைவு நிலை | கருவி இயல்புநிலைகள் | 1 | |
விரைவான திட்டம்
| சுழற்சி படி | வெப்பநிலை | நேரம் | சுழற்சிகள் |
| ஆரம்ப நிலைமாற்றம் | 95℃ | 30 நொடி | 1 |
| டினாடரேஷன் | 95℃ | 3 நொடி | 40 |
| அனீலிங்/நீட்டிப்பு | 60℃ | 20 நொடி ★ | |
| உருகும் வளைவு நிலை | கருவி இயல்புநிலைகள் | 1 | |
[குறிப்பு]: வேகமான நிரல் பெரும்பான்மையான மரபணுக்களுக்கு ஏற்றது, மேலும் நிலையான நிரல்களை தனிப்பட்ட சிக்கலான இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்பு மரபணுக்களுக்கு முயற்சி செய்யலாம்.
அ) அனீலிங் வெப்பநிலை மற்றும் நேரம்: ப்ரைமர் மற்றும் இலக்கு மரபணுவின் நீளத்திற்கு ஏற்ப சரிசெய்யவும்.
b) ஃப்ளோரசன்ஸ் சிக்னல் கையகப்படுத்தல் (★): கருவியைப் பயன்படுத்துவதற்கான வழிமுறைகளில் உள்ள தேவைகளுக்கு ஏற்ப பரிசோதனை செயல்முறையை அமைக்கவும்.
c) உருகும் வளைவு: கருவி இயல்புநிலை நிரலை சாதாரணமாகப் பயன்படுத்தலாம்.
3. முடிவு பகுப்பாய்வு
அளவு சோதனைகளுக்கு குறைந்தபட்சம் மூன்று உயிரியல் பிரதிகள் தேவைப்பட்டன.எதிர்வினைக்குப் பிறகு, பெருக்க வளைவு மற்றும் உருகும் வளைவு உறுதிப்படுத்தப்பட வேண்டும்.
3.1 பெருக்க வளைவு:
நிலையான பெருக்க வளைவு S- வடிவமானது.Ct மதிப்பு 20 மற்றும் 30 க்கு இடையில் குறையும் போது அளவு பகுப்பாய்வு மிகவும் துல்லியமானது. Ct மதிப்பு 10 க்கும் குறைவாக இருந்தால், டெம்ப்ளேட்டை நீர்த்துப்போகச் செய்து மீண்டும் சோதனையை மேற்கொள்ள வேண்டும்.Ct மதிப்பு 30-35 க்கு இடையில் இருக்கும்போது, வார்ப்புரு செறிவு அல்லது எதிர்வினை அமைப்பின் அளவை அதிகரிக்க வேண்டியது அவசியம், இதனால் பெருக்க செயல்திறனை மேம்படுத்தவும் முடிவு பகுப்பாய்வின் துல்லியத்தை உறுதி செய்யவும்.Ct மதிப்பு 35 ஐ விட அதிகமாக இருக்கும் போது, சோதனை முடிவுகள் மரபணுவின் வெளிப்பாட்டை அளவுரீதியாக பகுப்பாய்வு செய்ய முடியாது, ஆனால் தரமான பகுப்பாய்விற்கு பயன்படுத்தப்படலாம்.
3.2 உருகும் வளைவு:
உருகும் வளைவின் ஒற்றை உச்சம், எதிர்வினை விவரக்குறிப்பு நல்லது மற்றும் அளவு பகுப்பாய்வு செய்ய முடியும் என்பதைக் குறிக்கிறது;உருகும் வளைவு இரட்டை அல்லது பல உச்சங்களைக் காட்டினால், அளவு பகுப்பாய்வு செய்ய முடியாது.உருகும் வளைவு இரட்டை சிகரங்களைக் காட்டுகிறது, மேலும் இலக்கு அல்லாத உச்சம் ப்ரைமர் டைமரா அல்லது டிஎன்ஏ அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கமா என்பதை தீர்மானிக்க வேண்டியது அவசியம்.இது ஒரு ப்ரைமர் டைமராக இருந்தால், ப்ரைமர் செறிவைக் குறைக்க அல்லது உயர் பெருக்கத் திறனுடன் ப்ரைமர்களை மறுவடிவமைப்பு செய்ய பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.இது குறிப்பிடப்படாத பெருக்கமாக இருந்தால், அனீலிங் வெப்பநிலையை அதிகரிக்கவும் அல்லது ப்ரைமர்களை குறிப்பிட்ட தன்மையுடன் மறுவடிவமைப்பு செய்யவும்.
குறிப்புகள்
உங்கள் உடல்நலம் மற்றும் பாதுகாப்பை உறுதிப்படுத்த, தேவையான PPE, அத்தகைய ஆய்வக கோட் மற்றும் கையுறைகளை அணியவும்!
இந்த தயாரிப்பு ஆராய்ச்சி பயன்பாட்டிற்கு மட்டுமே!
