யுரேசில் டிஎன்ஏ கிளைகோசைலேஸ்
Uracil-DNA கிளைகோசைலேஸ் (UNG அல்லது UDG) என்பது 25 kDa மூலக்கூறு எடை கொண்ட E.coli இன் மறுசீரமைப்பு குளோன் ஆகும்.இது யூரேசில் கொண்ட ஒற்றை இழை மற்றும் இரட்டை இழை டிஎன்ஏவில் இருந்து இலவச யுரேசிலின் வெளியீட்டை ஊக்குவிக்கிறது, மேலும் ஆர்என்ஏவுக்கு எதிராக செயலற்றது, மேலும் பிசிஆர் பெருக்க தயாரிப்புகளை மாசுபடுத்துவதைத் தடுக்கப் பயன்படுத்தலாம்.பிசிஆர் வினையில் டிடிடிபிக்கு பதிலாக டியூடிபி மாற்றப்பட்டு, டியு பேஸ்களைக் கொண்ட பிசிஆர் பெருக்கத் தயாரிப்பு உருவாக்கப்பட்டால், என்சைம் யூ பேஸின் கிளைகோசிடிக் பிணைப்பை ஒற்றை இழை மற்றும் இரட்டை இழைகளில் தேர்ந்தெடுத்து உடைக்க முடியும் என்ற உண்மையின் அடிப்படையில் செயல்பாட்டின் கொள்கை அமைந்துள்ளது. டிஎன்ஏ மற்றும் பிசிஆர் பெருக்கத் தயாரிப்பை சிதைக்கும்.
பரிந்துரைக்கப்பட்ட விண்ணப்பம்
மாசு தடுப்பு பெருக்கம்
சேமிப்பு நிலை
நீண்ட கால சேமிப்பிற்காக -20°C, பயன்படுத்துவதற்கு முன் நன்கு கலக்கப்பட வேண்டும், அடிக்கடி உறைதல்-கரைப்பதை தவிர்க்கவும்.
சேமிப்பு தாங்கல்
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, நிலைப்படுத்தி, 50% கிளிசரால்.
அலகு வரையறை
37°C இல் 1 மணிநேரத்தில் dU தளங்களைக் கொண்ட 1µg ஒற்றை இழை DNAவை சிதைக்கத் தேவையான நொதியின் அளவு 1 அலகு ஆகும்.
தர கட்டுப்பாடு
1.SDS-PAGE எலக்ட்ரோஃபோரெடிக் தூய்மை 98%க்கு மேல்
2.பெருக்க உணர்திறன், தொகுதி முதல் தொகுதி கட்டுப்பாடு, நிலைத்தன்மை
3.1U UNG 2 நிமிடங்களுக்கு 50℃ இல் சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட பிறகு, 103 பிரதிகளுக்குக் கீழே உள்ள U கொண்ட டெம்ப்ளேட் முற்றிலும் சிதைக்கப்பட வேண்டும், மேலும் எந்தப் பெருக்கத் தயாரிப்பையும் உருவாக்க முடியாது.
4.வெளிப்புற அணுக்கரு செயல்பாடு இல்லை
வழிமுறைகள்
| கூறுகள் | தொகுதி (μL) | இறுதி செறிவு |
| 10 × PCR இடையக (dNTP இலவசம், Mg²+இலவசம்) | 5 | 1× |
| dUTPகள் (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTPக்கு பதிலாக) | - | 200-600 μM |
| 25 மிமீ MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 மி.மீ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 யூ |
| 5 U/μL யுஎன்ஜி | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × ப்ரைமர் மிக்ஸ்அ | 2 | 1× |
| டெம்ப்ளேட் | - | 1μg/எதிர்வினை |
| ddH₂O | 50 வரை | - |
குறிப்பு: a: qPCR/qRT-PCRக்கு பயன்படுத்தினால், ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வு எதிர்வினை அமைப்பில் சேர்க்கப்பட வேண்டும்.வழக்கமாக, 0.2 μM இன் இறுதி ப்ரைமர் செறிவு நல்ல பலனைத் தரும்;எதிர்வினை செயல்திறன் மோசமாக இருக்கும்போது, ப்ரைமர் செறிவு 0.2-1 μM வரம்பில் சரிசெய்யப்படலாம்.வழக்கமாக, ஆய்வு செறிவு 0.1-0.3 μM வரம்பில் உகந்ததாக இருக்கும்.ப்ரைமர் மற்றும் ஆய்வு ஆகியவற்றின் சிறந்த கலவையைக் கண்டறிய செறிவு சாய்வு சோதனைகள் செய்யப்படலாம்.
குறிப்புகள்
1.பிசிஆர் பெருக்க எதிர்வினைக்கு முன், அசுத்தமான டியூடிபி பெருக்க தயாரிப்புகளை எதிர்வினை அமைப்பிலிருந்து அகற்ற யுஎன்ஜி என்சைம் பயன்படுத்தப்படலாம், பின்னர் தயாரிப்பு மாசுபாட்டால் தவறான நேர்மறையான முடிவுகளைத் தவிர்க்கலாம்.
2.மாசு எதிர்ப்பு PCR எதிர்வினையில் UNG என்சைம் பயன்படுத்துவதற்கான உகந்த வெப்பநிலை பொதுவாக 2 நிமிடங்களுக்கு 50℃ ஆகும்;செயலிழக்க நிலை 5 நிமிடங்களுக்கு 95℃.
3.அடிக்கடி உறைதல்-கரைப்பதைத் தவிர்க்கவும், பெரிய வெப்பநிலை ஏற்ற இறக்கங்களை வெளிப்படுத்த வேண்டாம்.
4.பெருக்கப்பட வேண்டிய வெவ்வேறு மரபணுக்கள் dUTP இன் வெவ்வேறு பயன்பாட்டுத் திறன் மற்றும் UNG நொதிக்கான உணர்திறன் ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளன, எனவே, UNG அமைப்பின் பயன்பாடு கண்டறிதல் உணர்திறன் குறைவதற்கு வழிவகுத்தால், எதிர்வினை அமைப்பு சரிசெய்யப்பட்டு மேம்படுத்தப்பட வேண்டும், உங்களுக்கு தொழில்நுட்ப ஆதரவு தேவைப்பட்டால், தயவுசெய்து தொடர்பு கொள்ளவும். நம் நிறுவனம்.
