ஹாட்ஸ்டார்ட் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்
ஹாட் ஸ்டார்ட் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் (ஆன்டிபாடி மாற்றியமைத்தல்) என்பது தெர்மஸ் அக்வாட்டிகஸ் YT-1 இலிருந்து ஒரு சூடான-தொடக்க தெர்மோஸ்டபிள் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் ஆகும், இது 5′→3′ பாலிமரேஸ் செயல்பாடு மற்றும் 5´ மடல் எண்டோநியூக்லீஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது.ஹாட்-ஸ்டார்ட் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் என்பது ஒரு டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் ஆகும், இது தெர்மோலபைல் டாக் ஆன்டிபாடிகளால் மாற்றியமைக்கப்பட்டது.ஆன்டிபாடி மாற்றமானது PCR இன் தனித்தன்மை, உணர்திறன் மற்றும் விளைச்சலை அதிகரித்தது.
கூறுகள்
| கூறு | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4×1 மிலி | 4×10 மிலி | 4×50 மிலி | 5×400 மிலி |
| ஹாட் ஸ்டார்ட் டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் (ஆன்டிபாடி மாற்றியமைக்கப்பட்டது) (5 U/μL) | 0.1 மி.லி | 1 மி.லி | 5 மி.லி | 10×5 மிலி |
விண்ணப்பங்கள்
10 mM Tris-HCl (25℃ இல் pH 7.4), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM டிதியோத்ரிடோல், 0.5% ட்வீன்20, 0.5% IGEPALCA-630 மற்றும் 50% கிளிசரால்.
சேமிப்பு நிலை
0°Cக்கு கீழ் போக்குவரத்து மற்றும் -25°C~-15°C இல் சேமிக்கப்படும்.
அலகு வரையறை
ஒரு அலகு 75 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 30 நிமிடங்களில் 15 nmol dNTP ஐ அமிலக் கரையாத பொருளில் இணைக்கும் நொதியின் அளவு என வரையறுக்கப்படுகிறது.
தர கட்டுப்பாடு
1.Endஅணுக்கரு செயல்பாடு:4 மணி நேரம் 37℃ இல் 4 μg pUC19 DNA உடன் 20 U நொதியை அடைகாப்பதால், ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் தீர்மானிக்கப்பட்ட DNA வின் கண்டறியக்கூடிய சிதைவு ஏற்படவில்லை.
2.5 கேபி லாம்ப்டா பிசிஆர்:200 µM dNTPs மற்றும் 0.2 µM ப்ரைமர்கள் முன்னிலையில் 1.25 யூனிட் Taq DNA பாலிமரேஸ் உடன் 5 ng Lambda DNA இன் PCR பெருக்கத்தின் 25 சுழற்சிகள் எதிர்பார்க்கப்படும் 5 kb உற்பத்தியில் விளைகின்றன.
3.Exonuclease செயல்பாடு:10 nmol 5´-FAM ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுடன் 10 nmol 5´-FAM ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுடன் 37℃ 30 நிமிடங்களுக்கு குறைந்தபட்சம் 12.5 U Taq DNA பாலிமரேஸைக் கொண்ட 50 µl வினையின் அடைகாத்தல் கண்டறியக்கூடிய சிதைவை அளிக்காது.
4.RNase செயல்பாடு:10 µL வினையின் அடைகாத்தல் 20 U நொதியுடன் 1μg ஆர்என்ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்ட்களுடன் 2 மணிநேரம் 37°C க்கு ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் தீர்மானிக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏவைக் கண்டறியக்கூடிய சிதைவை ஏற்படுத்தவில்லை.
5.வெப்ப செயலிழப்பு:இல்லை.
எதிர்வினை அமைப்பு
| கூறுகள் | தொகுதி |
| டெம்ப்ளேட் டிஎன்ஏa | விருப்பமானது |
| 10 μM ஃபார்வர்ட் ப்ரைமர் | 0.5 μL |
| 10 μM ரிவர்ஸ் ப்ரைமர் | 0.5 μL |
| dNTP கலவை (ஒவ்வொன்றும் 10mM) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA பாலிமரேஸ்பி(5U/μL) | 0.125 μL |
| அணுக்கரு இல்லாத நீர் | 25 μL வரை |
குறிப்புகள்:
1) a.
| டிஎன்ஏ | தொகை |
| ஜீனோமிக் | 1 ng-1 μg |
| பிளாஸ்மிட் அல்லது வைரஸ் | 1 பக்-1 என்ஜி |
2) பி.சிறப்புப் பயன்பாடுகளில் Taq DNA பாலிமரேஸின் உகந்த செறிவு 5-50 அலகுகள்/mL (0.1-0.5 அலகுகள்/25 µL எதிர்வினை) வரை இருக்கலாம்.
வெப்ப சைக்கிள் ஓட்டுதல் நெறிமுறை
பிசிஆர்
| படி | வெப்ப நிலை(°C) | நேரம் | சுழற்சிகள் |
| ஆரம்ப நிலைமாற்றம்a | 95℃ | 1-3 நிமிடங்கள் | - |
| டினாடரேஷன் | 95℃ | 15-30 வி | 30-35 சுழற்சிகள் |
| அனீலிங்பி | 45-68 ℃ | 15-60 வி | |
| நீட்டிப்பு | 68℃ | 1kb/min | |
| இறுதி நீட்டிப்பு | 68℃ | 5 நிமிடங்கள் | - |
குறிப்புகள்:
1) பெரும்பாலான பெருக்கங்களுக்கு 95°C இல் 1 நிமிடம் ஆரம்பக் குறைப்பு போதுமானது.கடினமான டெம்ப்ளேட்டுகளுக்கு, 95°C வெப்பநிலையில் 2-3 நிமிடங்களுக்கு ஒரு நீண்ட டீனாட்டரேஷனை பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.காலனி பிசிஆர் உடன், 95 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் ஆரம்ப 5நிமிடங்கள் குறைப்பது பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
2) அனீலிங் படி பொதுவாக 15-60 வி.அனீலிங் வெப்பநிலையானது ப்ரைமர் ஜோடியின் Tm ஐ அடிப்படையாகக் கொண்டது மற்றும் பொதுவாக 45-68℃ ஆகும்.
