மல்டிபிளக்ஸ் ஒரு படி RT-qPCR Premix-UNG
பூனை எண்: HCB5145A
மல்டிபிளக்ஸ் ஒன் ஸ்டெப் RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) என்பது RNA ஐ அடிப்படையாகக் கொண்ட ஒரு மல்டிபிளக்ஸ் அளவு PCR கிட் ஆகும்.பரிசோதனையின் செயல்பாட்டில், ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் அளவு PCR ஆகியவை ஒரே குழாயில் மேற்கொள்ளப்பட்டன, இது சோதனை செயல்பாட்டை எளிதாக்கியது மற்றும் மாசுபாட்டின் அபாயத்தைக் குறைத்தது.இந்த கிட்டில், முதல் ஸ்ட்ராண்ட் சிடிஎன்ஏ வெப்ப-எதிர்ப்பு தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸால் திறமையாக ஒருங்கிணைக்கப்பட்டது மற்றும் ஹாட்ஸ்டார்ட் டேக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் மூலம் அளவு பெருக்கப்பட்டது.கருவியில் முக்கியமாக உகந்த எம்பி இடையக, என்சைம்கள் கலவை போன்றவை உள்ளன. தாங்கல் கரைசலில் ஏற்கனவே Mg உள்ளது2+மற்றும் dNTP.கூடுதலாக, குறிப்பிடப்படாத பிசிஆர் பெருக்கத்தை திறம்பட தடுக்கக்கூடிய மற்றும் பல qPCR எதிர்வினைகளின் பெருக்க செயல்திறனை மேம்படுத்தக்கூடிய காரணிகள் சேர்க்கப்படுகின்றன, இது பெருக்க செயல்திறனை உறுதிசெய்து பல பெருக்க எதிர்வினை வரை மேற்கொள்ள முடியும்.ஏரோசல் மாசுபாட்டின் அபாயத்தைத் திறம்பட தடுக்க dUTP/UDG அமைப்பு சேர்க்கப்பட்டது.
கூறுகள்
1. தாங்கல்
2. என்சைம் கலவை
விவரக்குறிப்பு
| சூடான தொடக்கம் | உள்ளமைக்கப்பட்ட சூடான தொடக்கம் |
| கண்டறியும் முறை | ப்ரைமர்-ஆய்வு கண்டறிதல் |
| PCR முறை | ஒரு படி RT-qPCR |
| பாலிமரேஸ் | Taq DNA பாலிமரேஸ் |
| மாதிரி வகை | டிஎன்ஏ |
களஞ்சிய நிலைமை
தயாரிப்பு உலர்ந்த பனியுடன் அனுப்பப்படுகிறது மற்றும் 1 வருடத்திற்கு -25~-15℃ இல் சேமிக்கப்படும்.அதை அடிக்கடி தவிர்க்க வேண்டும்உறைதல்-கரைத்தல்.தனித்தனியாக சேமிக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
வழிமுறைகள்
1.எதிர்வினை அமைப்பு
| கூறுகள் | தொகுதி (μL) | இறுதி செறிவு |
| 2 × MP தாங்கல் | 12.5 | 1× |
| என்சைம் கலவை | 1 | - |
| ப்ரைமர்/புரோப் கலவை (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| டெம்ப்ளேட் ஆர்என்ஏ | 1-10 | - |
| RNase இலவச H2O | 25 வரை | - |
குறிப்புகள்:
பயன்படுத்துவதற்கு முன் நன்கு கலக்க வேண்டும், வன்முறை அதிர்வுகளால் ஏற்படும் அதிகப்படியான குமிழ்களைத் தவிர்க்கவும்.
அ.ப்ரைமர் செறிவு: மல்டிபிளக்ஸ் ப்ரைமர் உள்ளிட்ட ப்ரைமர் கலவை, சூழ்நிலையைப் பொறுத்து உகந்த ப்ரைமர் செறிவு 0.l மற்றும் 1.0μM இடையே இருக்கலாம்.
பி.ஆய்வு செறிவு: மல்டிபிளக்ஸ் ஆய்வு லேபிளிங் வேறுபாடு ஃப்ளோரசன்ட் குழுவை உள்ளடக்கிய ஆய்வு கலவை, சூழ்நிலையைப் பொறுத்து உகந்த ஆய்வு செறிவு 0.05 மற்றும் 0.5μM இடையே இருக்கலாம்.
c.டெம்ப்ளேட் நீர்த்துப்போதல்: qPCR மிகவும் உணர்திறன் கொண்டது மற்றும் டெம்ப்ளேட்டை நீர்த்துப்போகச் செய்ய பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.கட்டுப்பாட்டு Ct மதிப்பு 20 மற்றும் 35 க்கு இடையில் பொருத்தமானது.
ஈ.சிஸ்டம் தயாரித்தல்: தயவு செய்து அல்ட்ரா க்ளீன் ஒர்க்கிங் டேபிளில் தயார் செய்யவும், மேலும் அணுக்கரு எச்சம் இல்லாமல் பைபெட்டர் மற்றும் ரியாக்ஷன் டியூப்;வடிகட்டி உறுப்புடன் துப்பாக்கி தலையைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.குறுக்கு மாசுபாடு மற்றும் ஏரோசல் மாசுபாட்டைத் தவிர்க்கவும்.
2. உகந்த சைக்கிள் ஓட்டுதல்நெறிமுறை
| மிதிவண்டி படி | வெப்பநிலை | நேரம் | சுழற்சிகள் |
| தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் | 50℃அ | 20 நிமிடங்கள் | 1 |
| ஆரம்பம்-மறுத்தல் | 95℃ | 5 நிமிடங்கள் | 1 |
| பெருக்க எதிர்வினை | 95℃ | 15 வினாடிகள் |
40-45 |
| 60℃ b | 30 வினாடிகள் c |
குறிப்புகள்:
அ.தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன்: வெப்பநிலை 42 ° C அல்லது 50 ° C ஐ தேர்ந்தெடுக்கலாம்.
பி.பெருக்க எதிர்வினை: வடிவமைக்கப்பட்ட ப்ரைமர்களின் Tm மதிப்பின் படி வெப்பநிலை சரிசெய்யப்படுகிறது.
c.ஃப்ளோரசன்ஸ் சிக்னல் கையகப்படுத்தல்: கருவி கையேட்டின் தேவைகளுக்கு ஏற்ப சோதனை செயல்முறையை அமைக்கவும்.
குறிப்புகள்
உங்கள் உடல்நலம் மற்றும் பாதுகாப்பை உறுதிப்படுத்த, ஆய்வக கோட் மற்றும் கையுறைகள் போன்ற தேவையான PPE ஐ அணியவும்.
